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第一节 显微镜的使用
一、 普通光学显微镜
（一） 光学部分
由物镜、目镜、聚光器、滤光片、反射镜、光源组成。
1. 物镜
它是决定显微镜性能的最重要部件，由低倍镜、高倍镜及油镜组成。物镜上均标记有光学性能及使用条件的数字和符号：常标有10/0.25，40/0.65，100/1.25等数字。10、40、100系指物镜的放大倍数；0.25、0.65、1.25表示物镜的数值孔径。有的油镜上标有“油”或HI（Homogeneous immersion，同质油浸）或Oil等字样，并在镜头下缘标有一圈黑线或红线。
2. 目镜
常用的惠更斯目镜（Huygens eyepiece）是由两块凸面向下的透镜组成，两块透镜之间或下面设一环状光栅，物体经物镜放大所成的物像即在此处，目镜测微计及指针安放在此平面上。目镜的作用是把物镜放大的物体实像，进一步放大成直立的虚像，目镜与物镜放大倍数的乘积为显微镜的总放大倍数。
3. 聚光器
聚光器可分为明视野聚光器和暗视野聚光器，生物显微镜配用前者明视野聚光器，包括聚光镜和可变光阑两个部件。
4. 滤光片
常用滤光片为蓝色的毛玻璃片，用以降低光强度并使视野照明均匀。此外还有绿、黄绿或蓝绿色等滤光片。滤光片的选择与应用对显微摄影甚为重要。
5. 反射镜
它是一面平、另一面凹的双面镜，安放于聚光器下方，使光源向聚光镜反射。一般自然光源情况下，应用平面镜。
6. 光源
常用的有自然光和人工光源；自然光方便、适用，但不可用直射日光，因为亮度太强，不易看清物像，而且伤害眼睛，人工光源常用的有目光灯，适用一般检查。
（二） 机械部分
由镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器、调焦装置等组成。
（三） 使用方法
由于各种显微镜型号不一，操作方法稍有差异，使用前需详细阅读产品说明书，严格按说明书要求进行操作。使用方法如下：
1. 显微镜位置
将显微镜置采光适宜的平台上，放稳。
2. 带电源的显微镜
先开启灯源，调整光源使亮度适宜；不带电源的显微镜，以平面反光镜正对自然光。
3. 被检涂片位置
将被检涂片置载物台上并固定。
4. 低倍物镜
转用低倍物镜，从侧面注视，用粗调使镜头缓慢下降（或缓慢升高载物台），使物镜前端与涂片接近，下降聚光镜至最低（光源不足时可适当升高）。
5. 双筒显微镜
若为双筒显微镜，调整双筒距离，使之适应于检查者双眼观察的位置。
6. 检查者眼睛
正对目镜、用粗调缓慢升起下降至影像出现，再用细调转动，直到能清楚看到物像为止。切忌眼睛观察目镜时，旋动调节使物镜与涂片接近，以至压碎载片、损坏镜头。
7. 高倍镜
使用高倍镜时，将聚光镜下降一半，先将物镜下降至距涂片约0.5mm处（若观察液体样品，需覆盖盖玻片），再用粗调缓慢提升，当见到模糊图像，再用细调调焦至清晰。调整聚光镜位置至最佳图像。当由低倍物镜转换高倍物镜时，一般可进行直接转换，再用细调适当旋动即可看到图像。但需注意，不配套的物镜，不得直接转换。
8. 油镜
使用油镜时，需将聚光镜升至最高，并需在干燥的涂片上滴加一滴香柏油，然后将镜头旋至浸入香柏油中，但勿接触玻片（玻片与镜头的距离约为0.1mm），再从目镜观察，用粗调升高镜筒（或降低载物台），至出现镜像后，再用细调使物像清晰。在整个调焦过程中，动作要慢，要细心，观察未染色涂片时，尤应注意。
9. 镜检完毕
镜检完毕后，用粗调上旋镜筒（或下旋载物台），取下涂片（关闭电源）。
10. 使用油镜后
以拭镜纸擦去镜头的油渍，再用含二甲苯的擦镜纸拭擦镜头，最后再用擦镜纸将镜头拭干。注意，切勿用手指或其他纸、布拭擦镜头。
11. 最后
将镜头转成“八”字形，或将未装镜头的转换器孔对准载物台，并将镜筒（或载物台）降低，将显微镜置放原处。
（四） 显微镜的维护
常用的显微镜，应尽可能有固定位置，并有防尘、防潮措施。
1. 拭擦
拭擦显微镜的机械部分可以使用干净柔软的细布。不宜用乙醇或乙醚。否则，会侵蚀油漆使之脱落。
2. 光学部件
光学部件沾染灰尘，宜用干净毛笔清除或用洗耳球吹除。物镜内的灰尘，可用摩擦带静电的塑料棒插入镜头内吸出。若镜片上有拭不掉的污迹，可用表面光滑的细木棍裹上脱脂棉或擦镜纸。
3. 防止镜片脱胶
物镜内的透镜多以胶合在金属套筒上，金属和玻璃的热膨胀系数不一，过冷或过热以及使用过多的有机溶剂，均可使镜片脱胶。因此，勿使显微镜受热，避免阳光直晒。
4. 搬动显微镜时
动作要稳和轻，应一手提臂一手托座，不可单独提臂，同时应避免强烈的震动，以免失去原有的精度。
5. 高倍物镜和油镜
需要倍加爱护高倍物镜和油镜。使用高倍物镜观察液体样品时，应加盖玻片，防止样品液浸入物镜内，使其受到浸蚀。
二、 体视显微镜
亦称实体显微镜或解剖显微镜，是一种能观察放大立体像，并能同时进行显微操作的显微镜。镜筒为两个，光学系统由两个接目镜和两个（或一个）接物镜组成。放大4～200倍。采用分挡变倍式或连续变倍式，现用的体视显微镜多为后者。使用时，只需转动放大倍数的调节盘，便可在像面保持不动的情况下连续改变放大倍数，使用非常方便。
药品微生物检验中，体视显微镜适于观察真菌菌落的生长情况，检查螨及螨卵。
三、 测微计的使用
测量细菌、真菌及酵母菌等的大小或计算细胞的数量，可用测微计。测微计由镜台测微计和目镜测微计组成一套。
（一） 镜台测微计
镜台测微计是显微测量的基本标尺，与目镜测微计的分度相比较，可确定目镜测微计分度在不同放大倍数时的分度值。它是在一块载玻片的中央胶粘一块圆形的盖玻片（厚0.17mm），其中央刻有2mm共分为200格（或1mm为100格）的细线，每格间距为10µm不同规格的测微计，均有分度值的标记。
镜台测微计不论使用何种目镜测微计，必须先用镜台测微计进行校正，以确定它的格值或分度值，由于镜台测微计的分度值是固定的，即每格等于10µm不论采用何种放大倍数的物镜，均不改变。
（二） 目镜测微计
目镜测微计是一块直径约为17.5mm的圆形玻片，使用时，安放在目镜的视场光阑上。目镜测微计按其刻度格式的不同，大体分为两种：直尺式和方格式。前者常用于测量细胞长度，后者不仅能测量长度，还可计数细胞数量。
1. 直尺式测微计
直尺式测微计常用规格有：10mm划分为50格（每格为0.2mm）；10mm划分为100格（每格为0.1mm）；或5mm划分为50格（每格为0.1mm），以及5mm划分为100格（每格为0.05mm）等，可根据测定对象的大小选用。
2. 方格式测微计
方格式测微计亦有数种规格，常见者有25mm 2分为25格（每格为1mm 2）；100mm 2分为100格（每格为1mm 2）；100mm 2划分为400格（每格为0.25mm）等三种规格。
（三） 使用方法
先将目镜测微计放在目镜内的视场光阑上，其刻度面应向下（与物像焦面一致），再将镜台测微计放在载物台上，使分度划线位于镜台孔中央（若使用油镜，应在测微计盖片上滴加香柏油）。调节焦点，先使目镜测微计和镜台测微计上的刻度一端准确对齐，再找出另一端也完全一致的刻度，即可算出目镜测微计的每格相等于镜台测微计的格数，进行比较的距离越长，目镜测微计每格所代表的分度值越准确。例如，用一高倍物镜观察镜台测微计的15格和目镜测微计的34格完全一致，镜台测微计的每小格为10µm则目镜测微计的每格长度即为4.4µm 10×15÷34=4.4）。
确定了目镜测微计的每格长度后，即可移去镜台测微计，测定样品。如其中任何条件改变时，均须重新进行校正确定目镜测微计的分度值。