第七章 内脏系统药物实验
第一节 硝酸甘油的扩张血管作用
【实验目的】
观察硝酸甘油对血管的扩张作用，了解其临床用途。
【实验原理】
硝酸酯类药物能舒张全身静脉和动脉，使心脏前、后负荷降低，心肌耗氧量减少；还能选择性舒张冠状动脉的输送血管和侧支血管，改善缺血区的血液供应，用于治疗心绞痛。因硝酸甘油脂溶性高，故本实验通过直接经皮肤用药，观察其对兔耳血管的扩张作用。
【实验动物】
家兔（以白色皮毛为佳）。
【实验条件】
1.药品
硝酸甘油注射液、生理盐水。
2.器材
兔固定器、注射器、棉签、手电筒、测量尺。
【实验方法】
1.取家兔1只，放入兔固定器内。在手电筒光的透照下，用测量尺分别测定家兔两侧耳部某一选定血管（以较明显、粗大血管为好）的宽度。
2.用注射器吸取硝酸甘油注射液，滴涂2～3滴在上述一侧选定血管周围，并用棉签均匀涂抹。2分钟后用测量尺测定其宽度。
3.用同样方法将生理盐水滴涂在另一侧选定血管周围，并用棉签均匀涂抹。2分钟后用测量尺测定其宽度。
【实验结果】
见表1-7-1-1。
表1-7-1-1 硝酸甘油扩张血管作用实验结果
【注意事项】
测定血管宽度时最好由同一人操作，以免误差太大。
【思考题】
1.硝酸甘油在临床上有哪些用途？
2.硝酸甘油为什么常常舌下给药？
第二节 强心苷对离体蛙心的强心作用
【实验目的】
1.学习离体蛙心灌注技术。
2.观察强心苷对离体蛙心的强心作用及其与钙离子的协同作用。
【实验原理】
强心苷是一类选择性作用于心脏的药物，具有正性肌力作用。强心苷类与心肌细胞膜上的Na+-K+-ATP酶结合后，使酶活性下降，使细胞内Na+增加，通过Na+-Ca2+交换，使细胞内Ca2+增加，从而增强心肌的收缩力。
【实验动物】
青蛙。
【实验条件】
1.药品
0.025%毒毛花苷K、任氏液、低钙任氏液、1%氯化钙溶液。
2.器材
BL-420生物功能实验系统、张力传感器、探针、蛙板、蛙心夹、斯氏蛙心插管、铁架台、双凹夹、试管夹、手术器械、烧杯（5mL、50mL）、注射器（1mL）、吸管。
【实验方法】
1.离体蛙心标本制备
（1）取青蛙1只，用探针破坏脑和脊髓，仰位固定于蛙板之上。剪开胸廓、心包膜暴露心脏，穿线结扎右主动脉，于左主动脉穿线备用。
（2）在左主动脉上剪一“V”形小口，将有任氏液的蛙心插管插入，并在心脏收缩时（主动脉瓣开放）通过主动脉球，转向左后方插入心室，见到插管内的液面随着心搏上下波动后，将松结扎紧并固定于套管小钩上。用滴管吸去套管内血液，换2～3次任氏液至洗净余血，以防止套管堵塞。
（3）剪断两根动脉，持套管提起心脏，从静脉窦以下把其余血管一起结扎，分离周围组织，在结扎处下剪断血管，使心脏离体。用任氏液连续换洗直至无血色，套管内保留1.5mL左右的任氏液。
2.固定离体蛙心
将蛙心套管固定于铁架台，用系有长线的蛙心夹夹住心尖，线的另一端连接张力传感器，打开BL-420生物功能实验系统，适当调节张力，描记正常的心脏搏动曲线。
3.给药并观察
待心脏活动稳定后，依次加入下列药物，注意观察心率、振幅、节律的变化。
（1）套管内换入等容积低钙任氏液，制作心功能不全的病理模型。
（2）当心肌收缩显著减弱时，向套管内滴加0.025%毒毛花苷K0.1～0.2mL，并观察其正性肌力作用。
（3）作用明显时，再向插管内加入1%氯化钙0.1mL。
（4）待作用稳定后，每隔30秒向插管内加0.025%毒毛花苷K0.1mL，直至心脏停搏。
【实验结果】
见表1-7-2-1。
表1-7-2-1 强心苷对离体蛙心的强心作用实验结果
【注意事项】
1.制备标本时，应小心插管，避免损伤心脏（包括静脉窦）。
2.勿混用加药滴管，加药量根据反应敏感情况，应由小到大，加药后立即用滴管搅匀。
3.随时滴加任氏液于心脏表面，以保持心肌细胞存活。
【思考题】
1.强心苷增强心肌收缩力的机制是什么？
2.强心苷有哪些临床用途？
第三节 利多卡因的抗心律失常作用
【实验目的】
1.观察利多卡因对氯化钡诱发的心律失常的对抗作用。
2.联系利多卡因的临床用途。
【实验原理】
氯化钡增加浦氏纤维Na+内向电流，提高舒张期去极化的速率，从而诱发异位节律。利多卡因通过阻滞心肌细胞膜Na+通道而产生抗心律失常作用。
【实验动物】
家兔。
【实验条件】
1.药品
3%戊巴比妥钠溶液、0.4%氯化钡溶液、0.5%利多卡因溶液。
2.器材
心电图机、BL-420生物功能实验系统、电子秤、兔手术台、注射器。
【实验方法】
1.取家兔1只，称重，3%戊巴比妥钠溶液1mL/kg静脉注射麻醉，仰位固定于手术台上。
2.麻醉兔后将针形电极分别插入兔四肢前侧皮下，然后启动BL-420生物功能实验系统，信号输入心电通道，选择Ⅱ导联，调定显速为25mm/s，增益为1/4mV/cm，监视心电图变化，待稳定后给药。
3.静脉注射氯化钡4mg/kg，做好给药标记，记录心律变化，注意是否出现期前收缩或室性心动过速。
4.当出现心律失常时，立即缓慢静脉注射0.5%利多卡因5mg/kg，记录给药时间和心电图变化，观察心律失常有无改善。若10分钟内无明显改善，可再次缓慢静脉注射半量利多卡因。
【实验结果】
见表1-7-3-1。
表1-7-3-1 利多卡因抗心律失常作用实验结果
【注意事项】
1.针形电极一定要插在皮下，针形电极按红（右上肢）—黄（左上肢）—绿（左下肢）—黑（右下肢）分别插入四肢皮下并与1通道连接。
2.利多卡因浓度不得高于0.5%，且应缓慢静脉注射，否则可引起利多卡因中毒，造成动物死亡。
3.氯化钡诱发心律失常为低钾所致双相性心动过速、室性期前收缩，持续约15分钟。
【思考题】
1.利多卡因抗心律失常的机制是什么？
2.利多卡因在临床上有哪些用途？
第四节 呋塞米的利尿作用
【实验目的】
1.观察呋塞米的利尿作用。
2.初步掌握外科手术尿管的插法。
【实验原理】
呋塞米是高效利尿药，可抑制肾小管髓袢升支粗段Na+-K+-2Cl-共转运体，增高肾小管液中Na+、K+、Cl-浓度，降低肾脏的稀释功能；同时髓质间液高渗状态下降，使肾脏的浓缩功能也下降，导致排出大量近似等渗的尿液。
【实验动物】
家兔（体重2～3kg）。
【实验条件】
1.药品
1%呋塞米注射液、生理盐水。
2.器材
兔手术台、电子秤、开口器、导尿管、注射器、胶布、量筒、烧杯。
【实验方法】
1.每组取体重相近的健康雄性家兔2只，称重并做好标记。用温水按30mL/kg灌胃后，仰位固定于兔手术台上。
2.先将导尿管用液体石蜡润湿，自尿道口轻轻插入，当导尿管进入膀胱后，可见尿液滴出。将导尿管固定，轻压腹部使膀胱内积存的尿液全部排出。分别收集两只家兔用药前30分钟内的尿液。然后，甲兔经耳缘静脉注射生理盐水0.5mL/kg，乙兔经耳缘静脉注射呋塞米0.5mL/kg，收集用药后30分钟的尿液。
【实验结果】
见表1-7-4-1。
表1-7-4-1 呋塞米的利尿作用实验结果
【注意事项】
家兔在实验前24小时应供给充足的饮水量或用青饲料喂养。
【思考题】
1.呋塞米的利尿作用机制、利尿特点是什么？
2.呋塞米的临床用途及不良反应有哪些？
第五节 硫酸镁中毒的解救
【实验目的】
1.观察镁盐的急性中毒反应及钙剂的解救作用。
2.掌握家兔注射给药方法。
【实验原理】
大剂量的硫酸镁通过拮抗Ca2+起到阻断神经肌肉接头作用，从而使兴奋的传递受阻，肌肉松弛麻痹。
【实验动物】
家兔。
【实验条件】
1.药品
25%硫酸镁溶液、5%氯化钙溶液。
2.器材
电子秤、注射器（5mL、10mL）、针头（5号）、乙醇棉球。
【实验方法】
1.取家兔1只，称重，观察正常活动及肌张力情况。
2.由耳缘静脉快速注射25%硫酸镁溶液2.0mL/kg，观察家兔活动情况的变化。
3.当家兔出现行走困难、肌肉松弛无力、低头卧倒时，立即由耳静脉缓慢注射5%氯化钙溶液4～8mL，观察家兔活动情况的变化。
【实验结果】
见表1-7-5-1。
表1-7-5-1 硫酸镁中毒的解救实验结果
【注意事项】
1.由于Mg2+具有中枢作用，耳缘静脉注射硫酸镁不易掌控，也可改为肌内注射25%硫酸镁溶液2.5mL/kg，5～30分钟后，可缓慢出现中毒现象。
2.也可使用其他钙剂，如葡萄糖酸钙等。
【思考题】
1.解救过程中，如果使用钙剂过量会导致什么样的后果？
2.如果钙剂过量中毒，可以用硫酸镁解救吗？为什么？
第六节 肝素的抗凝作用
【实验目的】
1.观察并比较肝素、双香豆素、枸橼酸钠的抗凝作用特点。
2.掌握肝素的药理作用，学会使用肝素的抗凝作用。
【实验原理】
肝素在体内、体外均具有强大的抗凝作用，能通过激活抗凝血酶Ⅲ来发挥作用；口服给药无效，须注射给药。双香豆素为口服的体内抗凝药，其结构与维生素K相似，能在肝脏中竞争性抑制维生素K，从而起到抗凝血的作用。枸橼酸钠为体外抗凝药，能与血液中的Ca2+形成难解离的可溶性络合物，使血中Ca2+浓度降低，从而起到抗凝作用；由于大剂量注射可干扰体内Ca2+浓度，故不用于体内抗凝。
【实验动物】
小鼠（约20g）、家兔。
【实验条件】
1.药品
0.2%肝素钠溶液、0.1%双香豆素溶液、生理盐水、0.25%肝素钠溶液、3.8%枸橼酸钠溶液、0.1%氯化钠溶液。
2.器材
电子秤、1mL注射器、5号针头、烧杯、棉球、75%乙醇、小鼠灌胃器、毛细玻璃管（1mm内径）、试管、1mL吸管。
【实验方法】
1.体内抗凝实验
（1）取小鼠3只，标记、称重。
（2）给药：甲鼠腹腔注射0.2%肝素钠溶液0.5mL，乙鼠腹腔注射生理盐水0.5mL做对照，丙鼠于实验前3天以0.1%双香豆素溶液0.5mL/10g灌胃，实验时腹腔可注射等量生理盐水（甲乙鼠也可在实验前3天灌胃等量生理盐水）。
（3）取血并记录凝血时间：给药后20分钟分别以毛细玻璃管眼眶取血，3分钟后，折断毛细玻璃管一小段，以后每隔30秒折断一次，当折断时看到有黏丝状物出现，即表示血液凝固，分别记录凝血时间。
2.体外抗凝实验
（1）取清洁干燥试管4支，编号。
（2）分别在①号试管加入0.25%肝素钠溶液；②号试管加入0.1%双香豆素溶液；③号试管加入3.8%枸橼酸钠溶液；④号试管加入生理盐水，各0.25mL。
（3）从家兔耳缘静脉抽取血液，每试管0.5～1mL，使其充分混合。
（4）每隔30秒倾倒一次，观察各个试管内血液变化。
（5）记录各个试管凝血时间。
【实验结果】
1.体内抗凝实验（表1-7-6-1）
表1-7-6-1 肝素体内抗凝实验结果
2.体外抗凝实验（表1-7-6-2）
表1-7-6-2 肝素体外抗凝实验结果
【注意事项】
1.眼眶采血难度较大，注意固定小鼠头部的手指，以免被咬伤。
2.向试管中加入血液或药液时，勿滴落到试管壁上。
第七节 缩宫素对离体子宫的兴奋作用
【实验目的】
1.观察缩宫素对离体子宫的兴奋作用。
2.学习离体子宫平滑肌运动的描记方法。
【实验原理】
缩宫素能兴奋子宫平滑肌，不同剂量的缩宫素对子宫产生的兴奋作用及其作用特点不同。
【实验动物】
家兔。
【实验条件】
1.药品
缩宫素（0.02U/mL、0.2U/mL、2U/mL）、乐氏液。
2.器材
BL-420生物功能实验系统、手术器械、数显恒温肌槽、滴管、温度计、玻璃皿、手术剪、镊子、平皿、针、线、烧杯、“Z”形管。
【实验方法】
1.空气栓塞法处死家兔，剖腹取出子宫，立即置于盛有乐氏液的玻璃皿中，取出一条子宫角，两端分别用线结扎，备用。
2.将家兔子宫一端系于“Z”形管的弯钩上，并放入数显恒温肌槽，另一端与BL-420生物功能实验系统换能器上的小钩相连，缓慢通入空气。
3.在BL-420生物功能实验系统中依次选择“实验项目”→“消化实验”→“消化道平滑肌生理特性”。
4.记录子宫正常收缩曲线5分钟。
5.加入0.02U/mL缩宫素0.2mL，待作用明显后，描记子宫收缩曲线，记录后用乐氏液冲洗3遍。
6.分别加入0.2U/mL与2U/mL缩宫素0.2mL进行实验，实验方法同上。
【实验结果】
见表1-7-7-1。
表1-7-7-1 缩宫素对离体子宫的兴奋作用实验结果
【注意事项】
1.把子宫一角取出及固定时不要损伤或过度牵拉子宫。
2.严格按照实验指导的给药顺序给药。
【思考题】
缩宫素对子宫作用的特点是什么？