十、乙型脑炎疫苗
流行性乙型脑炎（简称乙脑）是由乙型脑炎病毒（encephalitis B virus）引起的一种急性传染病，对儿童健康危害极大。 本病主要分布在亚洲的东亚和东南亚地区，经蚊传播，多见于夏秋季。 临床上急起发病，有高热、意识障碍、惊厥、强直性痉挛和脑膜刺激征等，重型患者病后往往留有后遗症，属于病媒生物传染病。
乙脑病毒是一种与登革热、黄热病和西尼罗河病毒有关的黄病毒，1934年日本学者首先从脑组织中分离出该病毒，故亦称日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus）。 病毒呈球状，直径在35～50nm，衣壳呈二十面立体结构，外有包膜，基因组为单股正链RNA，全长约11kb。WHO 报道称，乙脑病毒每年在全世界范围内可造成约17.5 万人感染，而中国每年的感染病例占全球病例的50%。 在所有地区，发病年龄均以10 岁以下儿童为主。 大多数乙脑病毒感染呈现轻微症状（发热和头痛）或无明显症状，但每200 例感染病例中大约会有一例出现急性高热、头痛、颈部僵硬、定向障碍、昏迷、癫痫、痉挛性瘫痪和死亡等严重的疾病症状。 出现这些疾病症状的患者，其病死率可高达30%。 因此，乙脑疫苗接种应被纳入将乙型脑炎视为公共卫生重点的所有地区的国家免疫计划。
根据基因序列的差异，目前乙脑病毒可分为5 个基因型，我国已分离出超过145 株该病毒，其基因型基本属于Ⅰ型和Ⅲ型，1975年以后基因Ⅰ型逐渐取代基因Ⅲ型成为主要流行毒株。 目前使用的乙脑疫苗的主要类型有细胞灭活疫苗和减毒活疫苗。
（一）细胞来源乙型脑炎灭活疫苗
细胞来源乙型脑炎灭活疫苗（inactivated Japanese encephalitis vaccine，JE-I）最早由北京生物制品研究所用地鼠肾细胞培养病毒成功制造了甲醛灭活疫苗。 1998年我国又成功研制出了纯化的Vero 细胞乙型脑炎灭活疫苗，之后在全国逐步推广应用，可应用于6月龄至10 周岁儿童和由非疫区进入疫区的儿童和成人。 2009年美国研发了一种新的乙脑灭活疫苗，是用Vero 细胞培养乙脑病毒减毒株SA14-14-2 株而制备的灭活疫苗，主要应用于17 岁以上的人群。 Vero 细胞灭活疫苗基础免疫2 针后抗体阳性率83.2%，GMT达1 ∶25.1。
地鼠肾细胞灭活疫苗是将病毒经小鼠脑内传代后将感染病毒的鼠脑研磨制成脑悬液用作疫苗生产的毒种，将脑悬液适当稀释后接种2 周龄叙利亚地鼠（黄金地鼠）肾细胞培养，经增殖后，收获病毒滴度达到高峰时的病毒培养液，经1 ∶4 000 ～1 ∶2 000 甲醛灭活后加硫柳汞制成灭活疫苗。 有效成分为灭活的乙型脑炎病毒P3 株，为橘红色澄明液体，含硫柳汞防腐剂，0.5ml/剂。 为减轻疼痛，注射前加入适量亚硫酸氢钠溶液，疫苗由红色变为黄色，即可注射。
Vero 细胞乙脑灭活疫苗的工艺为Vero 细胞培养，细胞成致密单层后，接种P3 株乙脑病毒液，洗换，多次收获后经甲醛灭活，超滤浓缩，纯化（超速离心或层析），稀释，加稳定剂，冻干后即获得纯化乙脑灭活疫苗。 有效成分为灭活的乙型脑炎病毒P3 株，成品中添加的辅料主要包括明胶、麦芽糖、人血白蛋白，疫苗稀释剂为灭菌注射用水。 本品为冻干制剂，呈白色疏松体，水分不高于3.0%，复溶后为无色澄明液体，无异物。
（二）乙型脑炎减毒活疫苗
乙型脑炎减毒活疫苗（live Japanese encephalitis vaccine，JE-L）是通过使病原体的毒力减弱后获得的一种由完整的微生物组成的疫苗制品。 乙脑减毒活疫苗是中国药品生物制品检定所和成都生物制品研究所历经半个世纪，自主研发成功的疫苗，是我国疫苗产品中拥有自主知识产权的制品之一，也是唯一用于人类的乙脑减毒活疫苗。 该疫苗自1988年获得国家批准生产使用以来，已累计生产和接种近4 亿人次。 是国家计划免疫采购的疫苗，对预防乙脑发病、保护易感儿童起到了重要作用。
减毒活疫苗的免疫保护机制是模拟自然发生的感染免疫过程，类似于机体的自然感染而又无临床症状。 活疫苗免疫可产生广谱的免疫应答，包括体液和细胞免疫、特异与非特异免疫，使机体获得较广泛的免疫保护。 由于使用的是活微生物，与灭活疫苗相比，可以在机体内长时间起作用，刺激细胞免疫系统引起较强的细胞毒T 淋巴细胞应答。 在乙脑非流行区，免疫1 针后中和抗体阳转率和抗体水平随免疫剂量的减少而降低，病毒剂量为106.7TCID50/ml，阳转率一般在90%～100%；在乙脑流行区，对免疫前抗体阴性或低水平儿童，免疫1 针后抗体阳转或抗体提高4 倍以上阳转率为93%～95%。
乙脑减毒活疫苗的生产工艺：取10 ～14日龄SPF 黄金地鼠无菌肾脏制备单层贴壁细胞，接种病毒后培养并进行多次病毒收获，经检测合格后澄清过滤并合并为一批原液，按滴度稀释后加入适宜稳定剂即制成半成品，然后进行分装冻干。
根据《中华人民共和国药典（2020年版）》规定的质量标准，乙脑减毒活疫苗的检测指标中疫苗病毒滴度一项尤为重要，因其直接关系到疫苗的效价和免疫原性，冻干种子批病毒滴度不低于5.7lgPFU/ml，液体种子批病毒滴度应不低于7.2lgPFU/ml。