2.2 虎皮香菇胞外多糖
2.2.1 培养基
虎皮香菇为西南科技大学贺新生教授提供，为野生子实体的组织分离菌丝体培养物，现保存于郑州轻工业学院发酵工程研究室。
①PDA培养基：200g去皮土豆，20g葡萄糖，108g琼脂，蒸馏水补至1000mL，pH自然。
②基础培养基：30g葡萄糖，3g酵母粉，蒸馏水补至1000mL，pH自然。
2.2.2 培养条件的优化
优化过程同2.1.2，优化结果讨论如下：
（1）虎皮香菇产胞外多糖培养周期的确定 胞外多糖产量的变化与菌丝体生物量的变化呈正相关，在发酵前期胞外多糖的产量随菌丝体生物量的增加而增加，培养第2～8天菌丝生物量和EPS产量均增加但之间无显著差异，处于调整期，第8～12 天为菌丝干重和EPS产量快速积累时期，当培养第12～14天时，胞外多糖含量开始降低（图2.19），可能由于多糖自身溶解或者多糖浓度的增加抑制自身多糖再分泌。综合考虑菌丝生物量和EPS产量，确定虎皮香菇的最佳培养时间为12d。
图2.19 培养时间对虎皮香菇菌丝生物量（■）和EPS产量（●）的影响
（2）单因素试验优化虎皮香菇培养条件 碳源对虎皮香菇的菌丝干重和EPS产量均有影响，乳糖优于其他碳源，故选用乳糖为最佳碳源；氮源对虎皮香菇的菌丝干重和EPS产量影响较为显著，一般而言，无机氮源不利于菌株的生长，有机氮源利于菌株的生长和胞外多糖的积累，酵母粉为氮源时菌丝干重和EPS产量均明显提高，故选用酵母粉为最佳氮源。无机盐对于菌丝干重和EPS含量的影响与对照相比无明显差异，故在后续试验中不添加无机盐（图2.20）。
结果表明，C/N比为15时，虎皮香菇的菌丝干重和EPS产量最大；最佳pH为8；最佳碳源浓度为6%（图2.21）。pH的变化会影响菌株对培养基的利用速率，从而影响菌株的生长和产物的积累。C/N比是影响发酵过程的重要因素，氮源添加量过高，易导致菌丝体生长过于旺盛，不利于代谢产物的合成；而氮源不足，菌体生长慢，影响EPS产量。
图2.20 碳源、氮源和无机盐对虎皮香菇菌丝生物量（■）和EPS产量（●）的影响
图2.21 pH、碳源浓度和碳氮比对虎皮香菇菌丝生物量（■）及EPS产量（●）的影响
（3）均匀设计法优化虎皮香菇产胞外多糖发酵罐培养条件 均匀设计法是一种多因素与多水平的实验设计方法，采用回归分析法，定量地预测优化条件和结果，具有试验次数少、方便、适用、预测性好等特点，是优化提取工艺中一个十分有用的工具。本试验选取C/N比、搅拌速度和通气率3个因素，各因素取5个水平，考察这3个因素对虎皮香菇发酵罐胞外多糖产量的影响（表2.9）。根据既定的因素水平方案进行试验，结果见表2.10。
表2.9 虎皮香菇均匀设计实验的因素和水平
注：X1，X2，X3分别为C/N比例，搅拌速度和通气率。1，2，3，4，5分别代表不同的水平数。
表2.10 虎皮香菇利用均匀设计表U5（53）的实验设计和实验结果
对表2.2胞外多糖产量进行二次多项式逐步回归分析，得回归方程：
Y＝41.5468572 + 0.05406072142X1×X1+ 0.00001261846055X3×X3－0.29017030133X1X2，相关系数R＝0.9998，F值＝759.7679，显著水平P＜0.05，剩余标准差S＝0.2878，说明该方程能很好地拟合虎皮香菇胞外多糖发酵条件优化的过程。
式中，Y为虎皮香菇的EPS产量预测值，41.5468572是由各实验组得到的常数，X1，X2，X3分别代表C/N比例、搅拌速度和通气率对EPS产量的影响，方程表明：EPS产量与X1，X2，X3均有关系，X1X2表示对应两个因素间的相互作用。整个方程描述了不同因素及因素间的交互作用对虎皮香菇EPS产量的不同作用。
采用DPS v7.05软件对虎皮香菇均匀设计实验的分析得知，最佳参数：C/N比为25，搅拌速度为202r/min，通气率为1.5vvm。验证实验表明，在优化条件下培养，EPS产量为56.58g/L，高于均匀设计试验中的5组试验结果，表明该优化结果具有明显的指导意义；但与回归模型的预测值58.97g/L还有一定的误差，相对误差为4.05%。
通过单因素实验，优化了二年残孔菌和虎皮香菇的摇瓶培养条件。二年残孔菌摇瓶产EPS的最佳条件：40g/L麦芽糖，8g/L蛋白胨，5mmol/L KH2PO4，培养时间8d，pH为5；在此基础上，选用C/N比、通气率和搅拌速度三个因素，运用旋转单一法对二年残孔菌的发酵罐培养条件进行优化，当C/N比为18.33，通气率为0.67vvm，搅拌速度为50r/min时，胞外多糖产量可达13.0932g/L；虎皮香菇摇瓶产EPS的最佳条件为60g/L乳糖，4g/L酵母粉，培养时间为12d，pH为5。发酵罐培养优化中，运用均匀设计法对虎皮香菇的C/N比、通气率和搅拌速度三个因素进行优化，当C/N比为25，搅拌速度为202r/min，通气率为1.5vvm时，胞外多糖产量最高，达56.58g/L。
2.2.3 虎皮香菇发酵罐培养形态学、流变学变化
（1）培养基 虎皮香菇优化培养基：60g/L乳糖，2.4g/L酵母粉，pH8，补水到1000mL。虎皮香菇未优化培养基：60g/L乳糖，12g/L酵母粉，pH8，补水到1000mL。
（2）发酵罐培养 5L发酵罐装入优化或未优化培养基3.5L，离位灭菌后冷却接种。设置发酵罐控制参数：虎皮香菇C/N比为25和5，通气率为1.5vvm和3.0vvm，搅拌速度为202r/min和150r/min。自接种开始，每隔48h，取样一次，一次取3个平行。
样品的处理流程见图2.22。
图2.22 样品处理流程
（3）真菌形态学的研究 显微镜下观察菌丝球形态后，通过DT2000图像分析软件分析，根据菌丝球的平均直径、菌核面积、菌丝球面积、菌丝球周长、圆度等参数计算出粗糙度、紧密度。公式如下所示：紧密度＝菌核面积/菌丝球面积；粗糙度＝（菌丝球的周长）2/面积×4π。
在菌丝球染色时，先加入与发酵液等体积的固定剂和少许染色剂，4℃冰箱放置1d，然后用蒸馏水多次冲洗染色的菌丝体，将其放在载玻片上，待晾干后在40倍显微镜下拍照观察。固定菌丝球或对菌丝球进行染色操作时，可事先低速离心，以除去多余发酵液或固定剂，节约试剂。
（4）真菌流变学的研究 测定样品发酵液黏度时应注意使样品混合均匀，选择合适的转子及转速并记录，黏度＝黏度计读取数值×相对应转子系数（相关系数与使用的转子、转速之间的关系见表3.1）。
表2.11 黏度计转子转速相关系数表
不同发酵时间菌丝球形态变化和菌丝球平均直径、紧密度、圆度和粗糙度的变化见图2.23和图2.24。在优化发酵条件下，菌丝球第2天外围菌丝生长旺盛，随着时间的增加，菌核面积逐渐增加，外围菌丝也逐渐减少，这可能是由于发酵后期，菌丝生长到了稳定期，菌丝生长同时也受到搅拌速度产生的剪切力影响；而在未优化发酵条件下，第2天菌丝球形态较完整，随着培养时间的延长，外围菌丝逐渐变多。虎皮香菇在两种发酵条件下菌丝球的圆度和紧密度随着时间的延长均逐渐增加，第2天粗糙度在两种发酵条件的差异明显，但第2天后两者的粗糙度无显著差异，紧密度在第10天和第12天两种发酵条件下有显著差异。
图2.23 虎皮香菇菌丝球形态学观察
图2.23 虎皮香菇菌丝球形态学观察（续）
图2.24 虎皮香菇优化（〇）和未优化（●）条件的形态学指标
如表2.12和表2.13所示为虎皮香菇菌丝球形态学参数与菌丝干重和EPS产量的相关系数表。表中可以看出，在两种发酵条件下，菌丝球的平均直径与菌丝干重和EPS产量均具有一定的正相关性，但无显著差异；圆度与优化条件中的菌丝干重呈正相关（P＜0.01），与EPS产量有显著正相关性（P＜0.05）；紧密度与优化培养基中的菌丝干重有正相关性，但无显著差异，与EPS产量在0.01水平呈正相关性；粗糙度与优化和未优化发酵条件中的菌丝干重和EPS产量呈负相关性，无显著差异。
表2.12 虎皮香菇优化培养基菌丝球形态参数相关性系数表
∗在0.05水平（双侧）上显著相关。∗∗在0.01水平（双侧）上显著相关。
表2.13 虎皮香菇未优化培养基菌丝球形态参数相关性系数表
续表
∗在0.05水平（双侧）上显著相关。∗∗在0.01水平（双侧）上显著相关。
胞外多糖溶液是典型的非牛顿流体，溶液黏度随着胞外多糖浓度的增加而增大。如图2.25和图2.26所示，优化和未优化发酵条件下的虎皮香菇发酵液黏度与培养时间呈正比例关系，说明胞外多糖溶液的黏度也随着时间的增加而增加，优化发酵条件下的发酵液黏度明显高于未优化条件，这与菌丝干重和EPS产量的变化趋势一致。虎皮香菇的胞外多糖有良好的流变学特性，具备食品添加剂的开发潜力，在今后的实际应用中可以考虑。
图2.25 虎皮香菇优化（〇）和未优化（●）条件下黏度随培养时间的变化
使用SPSS17.0分析发酵液黏度与菌丝干重和EPS产量之间的相关性，如表2.14和表2.15所示，在优化和未优化发酵条件下，发酵液黏度与菌丝干重和EPS产量均有极显著相关性（P＜0.01），这与图3.8的发酵液黏度与菌丝干重和EPS产量变化趋势也一致，说明胞外多糖溶液的黏度随着发酵液黏度的增大而增大，刘晓连等研究者认为这是由于随着多糖溶液浓度的提高，多糖分子之间的交联及聚合度也越来越高。
图2.26 虎皮香菇优化（1）和未优化（2）条件下菌丝干重（■）和EPS产量（●）随时间的变化
表2.14 虎皮香菇优化培养基发酵液流变学参数相关性系数表
∗在0.05水平（双侧）上显著相关。∗∗在0.01水平（双侧）上显著相关。
表2.15 虎皮香菇较差培养基发酵液流变学参数相关性系数表
续表
∗∗在0.01水平（双侧）上显著相关。
2.2.4 胞外多糖产量及结构分析
（1）多糖的纯化精制及分析方法 同2.1.3。
（2）胞外多糖的纯化 将虎皮香菇粗胞外多糖通过Sepharose CL－6B凝胶柱层析，共收集60管，用苯酚硫酸法检测这60管中的多糖吸光度，波长280nm处直接检测这60管的蛋白吸光度值，以管号对吸光度作图，结果如图2.27所示，虎皮香菇胞外多糖在处理前后均为单一洗脱峰。收集各组分浓缩、透析除去NaCl，然后冷冻干燥得到精制胞外多糖。
图2.27 不同处理下虎皮香菇胞外粗多糖经Sepharose CL－6B柱层析多糖和蛋白的测定结果
（3）不同处理下虎皮香菇胞外多糖的单糖组分分析 将经丙酮、吐温80处理和对照组的虎皮香菇精制胞外多糖峰与气相数据库中的单糖峰进行比对，经丙酮处理的虎皮香菇胞外多糖和对照组的胞外多糖均含有7种单糖，含量最多的是甘露糖和葡萄糖，丙酮处理的虎皮香菇EPS甘露糖组分（44.20%）比例有所下降，葡萄糖（43.82%）比例提高；吐温80处理的虎皮香菇EPS含有4种单糖，含量较多的是葡萄糖（60.23%）和甘露糖（29.59%）。说明虎皮香菇经表面活性剂和有机溶剂处理后单糖种类和含量均发生了变化。虎皮香菇处理前后均为杂多糖，杂多糖一般具有较好的免疫增强作用，有报道称，具有抗肿瘤活性的灰树花多糖也为含有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖的杂多糖（表2.16）。
表2.16 不同条件下虎皮香菇精制胞外多糖的单糖组成
（4）不同处理下虎皮香菇胞外多糖的红外光谱分析 红外光谱分析虎皮香菇经吐温80和丙酮处理前后均具有一般多糖在红外光谱图中的特征性结构，有以下几组特征峰：3259.2cm－1、3270.3cm－1和3331.7cm－1处峰值是由多糖中O—H的伸缩振动引起的，是宽展圆滑吸收峰，得知羟基在分子间发生缔合，不是游离的羟基；2931.2cm－1和2926.3cm－1处吸收峰是由多糖中C—H的伸缩振动引起的，具有典型的多糖特征；1123.2cm－1、1116.7cm－1处是由多糖中C—O—C的伸缩振动引起的；1036.5cm－1、1093.5cm－1是由多糖中C—O—H的伸缩振动引起的；772.1cm－1是对称环振动峰；1300～1000cm－1的吸收峰显示了C—O伸缩振动键的存在；图（1）中，1410cm－1处是由C—H的变角振动引起的；1123.2cm－1、1026.4cm－1处是由多糖中C—O—C和C—O—H键的伸缩振动引起的，图（2）中，2926.3cm－1和1450.4cm－1峰表明有—CH2基的存在；1070.9cm－1为β－D－吡喃葡萄糖苷的吸收峰；由此可见虎皮香菇经丙酮处理后为含有β－型的多糖。图（3）中，1641.5cm－1处吸收峰是C═O键的非对称伸缩振动，1413.9cm－1处吸收峰是C═O键的对称伸缩振动所致，说明有羧酸的存在。在601.9cm－1、614.4cm－1、598.6cm－1存在吸收峰，说明多糖有葡萄糖残基。由以上分析可知，虎皮香菇经吐温80和丙酮处理前后均为含葡萄糖的多糖，但存在差异，吐温80处理的EPS为酸性多糖，经丙酮处理后为β－D－吡喃葡聚糖，结构上的不同需要进一步的实验分析。据报道，抗肿瘤活性多糖一般都含有β－型糖苷键，同时糖醛酸的存在，也是很多酸性多糖具有特征生理活性的重要原因之一，这为进一步研究虎皮香菇多糖的生理和药理功能提供了理论依据（图2.28）。
图2.28 不同处理下虎皮香菇胞外多糖的红外光谱图
［（1）：对照；（2）：丙酮；（3）：吐温80］
（5）不同处理EPS的刚果红实验结果 刚果红是一种染料，能够与具有三股螺旋结构的多糖形成络合物，该络合物的最大吸收波长与刚果红相比会发生红移，在一定的NaOH浓度范围内，最大吸收波长发生特征变化，当NaOH浓度大于0.3mol/L时，最大吸收波长急剧下降。如图2.29（1）所示，虎皮香菇胞外多糖可与刚果红形成络合物，在0～0.5mol/L NaOH浓度范围内，在刚果红作用下多糖的最大吸收波长较刚果红最大吸收波长升高，但波长并未呈现急剧下降的趋势，因此是否具有三维螺旋结构还需进一步研究。如图2.29（1）、（2）所示，丙酮和吐温80处理的虎皮香菇胞外多糖的最大吸收波长向长波方向移动，当NaOH浓度增大到一定程度，最大吸收波长下降，多糖的三股螺旋结构解体，变为无规则的线团形式，即在弱碱性范围内，丙酮和吐温80处理的虎皮香菇胞外多糖可形成有序的3股螺旋构象，但在强碱性条件下，由于破坏了分子间氢键，3股螺旋结构解体为单股，不能与刚果红形成络合物。据报道，香菇多糖的三股螺旋结构在增强抗肿瘤效应中承担了重要的角色。
图2.29 不同处理下虎皮香菇外多糖的刚果红实验结果
［（1）：对照；（2）：丙酮；（3）：吐温80］
（6）不同处理EPS的热重分析 在对照组中，虎皮香菇EPS从室温加热到160℃后多糖质量迅速下降，即出现失重台阶，在此温度之前多糖都比较稳定，质量减少量比较小，说明虎皮香菇精制胞外多糖在加工过程中温度最好不要超过160℃，以确保其能稳定地发挥作用。当温度升高到160℃，多糖质量剩余92%，直到600℃，多糖质量剩余42.98%，之后随着温度升高，多糖质量又迅速下降可能是由于温度过高导致了多糖内部化学键的断裂。丙酮处理的虎皮香菇EPS质量急速下降，直到411℃，多糖质量剩余45.91%，这说明从室温加热到411℃不仅失去了吸附水也可能发生了强烈的热裂解反应（图2.30）。吐温80处理的虎皮香菇EPS从室温加热到140℃多糖质量迅速下降，多糖质量失去了15.77%，可以认为在25.89～140℃之间发生的失重，这是由于水分导致的，其本身并没有发生失重的状况。由此可见，虎皮香菇经吐温80处理后的热稳定性比经丙酮处理后更好。
图2.30 不同处理下虎皮香菇胞外多糖的热重图
［（1）：对照；（2）：丙酮；（3）：吐温80］
（7）不同处理下虎皮香菇胞外多糖的相对分子质量 以Kav为横坐标，葡聚糖标准品系列的分子质量的对数值（LogM）为纵坐标作图得分子质量标准曲线，标准曲线的线性回归方程：y＝－5.4858x+6.5379（R2＝0.9937），将不同洗脱体积代入线性方程即可求得相应的相对分子质量。结果如图2.31所示：未经处理前虎皮香菇胞外糖分子质量为12ku，吐温80处理的虎皮香菇胞外多糖分子质量为22.1ku，丙酮处理的虎皮香菇胞外多糖分子质量为137ku。
图2.31 不同处理下虎皮香菇胞外多糖的相对分子质量
（8）小结在优化摇瓶发酵条件的基础上，在发酵中后期分别添加吐温80和丙酮，二年残孔菌的胞外多糖产量达7.21g/L和9.54g/L，分别提高10.03%和45.60%；虎皮香菇的胞外多糖产量达12.29g/L和20.83g/L，分别提高22.30%和107.26%。这与Peter C.K.Cheung等人的报道一致，该研究发现虎奶菇（Pleurotus tuber－regium）发酵培养第5天添加0.3%（体积分数）的吐温80后，EPS产量提高41.80%。两种真菌添加吐温80和丙酮均提高了胞外多糖的产量，这可能是由于吐温80和丙酮增加了细胞膜中油酸的含量，影响细胞膜的组成，从而提高细胞膜的通透性，提高了胞外多糖产量。
不同来源的真菌多糖在相对分子质量和某些糖苷键组成上会有差异。研究添加吐温80和丙酮后对两种真菌的结构影响，红外光谱和气相色谱分析结果表明，对照组和丙酮、吐温80处理后的二年残孔菌EPS均含有α－型和β－型糖苷键，丙酮处理的二年残孔菌EPS缺少了半乳糖，这可能对多糖的生物活性产生一定的影响；吐温80和丙酮处理的虎皮香菇胞外多糖均为β－D型酸性杂多糖，且单糖组分发生了明显变化。近几年的研究报道表明，具有抗肿瘤活性的真菌多糖如多孔菌多糖、裂褶菌多糖、香菇多糖等均有β－型糖苷键，由此推断，多糖中含有β－型糖苷键是两种真菌多糖生物活性的结构前提。
热重分析结果表明：吐温80和丙酮处理的二年残孔菌EPS失重率均有所变化；丙酮和吐温80处理的虎皮香菇EPS的失重率有相应的变化，其中吐温80处理的EPS热稳定性比经丙酮处理后好。刚果红实验对多糖的高级结构进行初步表征，吐温80和丙酮处理后的二年残孔菌EPS具有三股螺旋结构，吐温80和丙酮处理的虎皮香菇EPS构象发生了变化，其胞外多糖出现了明显的三股螺旋结构。多糖的三股螺旋构象对抗肿瘤活性有重要影响，据报道，具有三股螺旋结构的裂褶菌（Schizophyllum commune）多糖具有较强的抗肿瘤活性，这对于两种真菌多糖的生物活性进一步研究至关重要。
凝胶渗透层析法测定二年残孔菌胞外多糖的分子质量可知：对照组二年残孔菌胞外多糖分子质量为22.1ku，吐温80处理后胞外多糖分子质量为40.5ku，丙酮处理后胞外多糖分子质量为55ku；对照组虎皮香菇胞外多糖分子质量为12.0ku，经吐温80处理后其分子质量为22.1ku，经丙酮处理后其分子质量为137.0ku。研究表明，分子质量大小是多糖发挥生物活性的必要条件，多糖分子质量大于10.0ku时才具有较强的抗肿瘤活力。
2.2.5 胞外多糖的生物活性
抗氧化活性及抗肿瘤活性测试方法同2.1.5。
（1）不同处理虎皮香菇胞外多糖的抗氧化活性 如图2.32（1）所示为虎皮香菇胞外粗多糖羟基自由基的清除能力的结果，如图3.32所示，随着反应体系中虎皮香菇粗胞外粗多糖溶液浓度的增加，其对羟基自由基的清除能力呈线性增加。多糖浓度为10g/L时，对照组虎皮香菇EPS的羟基自由基的清除率为24.84%，添加丙酮和吐温80后EPS清除羟基自由基的能力均有提高，其中添加丙酮后清除率为29.26%；添加吐温80后清除羟基自由基的能力为27.09%。如图2.32（2）所示为虎皮香菇胞外粗多糖DPPH自由基的清除率的结果，对照组和吐温80处理的虎皮香菇EPS随着多糖浓度的增加，DP P H自由基的清除率也增加，但是其幅度不大，添加丙酮后虎皮香菇的DPPH自由基的清除率明显提高，当多糖浓度为8g/L时，·DPPH的清除率达到63.08%，比对照组提高将近2倍。
图2.32 不同处理虎皮香菇胞外多糖的抗氧化活性
（2）虎皮香菇不同处理胞外多糖的抗肿瘤能力 随着培养时间的增加，不同条件下的虎皮香菇的胞外多糖对细胞的抑制率呈线性关系。Hepg 2细胞培养72h后，丙酮处理的虎皮香菇胞外多糖浓度在50～400μg/mL范围之间，与对照组相比均显著（P＜0.01），浓度达到400μg/mL时，最大抑制率达22.85%，比对照组（9.75）提高134%，吐温80处理的虎皮香菇胞外多糖对Hepg 2细胞的抑制率也增加，但与对照组相比无显著关系（图2.33）。
图2.33 不同处理虎皮香菇EPS对Hepg 2肿瘤细胞生长的抑制效果
（●空白；〇丙酮；□吐温80）
随着培养时间的延长，虎皮香菇胞外多糖浓度的提高，对MG63细胞的抑制率逐渐增加。当培养72h后，丙酮和吐温80处理的虎皮香菇胞外多糖浓度达400μg/mL，与对照组相比均显著（P＜0.05），丙酮处理后的虎皮香菇胞外多糖对MG63细胞的抑制效果最好，最大抑制率达25.29%，与对照组（10.76%）相比提高了135%（图2.34）。
图2.34 不同处理虎皮香菇EPS对MG63肿瘤细胞生长的抑制效果
（●空白；〇丙酮；□吐温80）
（3）小结 真菌多糖是中药的一种活性成分，是机体的能量物质，存在于所有的细胞膜中，参与细胞的多种生理活动。目前，人们越来越关注真菌多糖的生物活性，特别是抗氧化和抗肿瘤的作用。吐温80和丙酮处理后的二年残孔菌和虎皮香菇胞外多糖的抗氧化活性和抗肿瘤能力均有所提高，这与林贵兰等人的研究结果基本一致，为进一步开发抗氧化剂提供理论依据。多糖浓度为10g/L时，丙酮处理后的EPS羟基自由基清除率达到63.23%，DP P H自由基清除率达到44.26%；多糖浓度为400μg/mL时，吐温80处理的EPS对Hepg 2细胞的抑制率与对照相比呈极显著关系（P＜0.01），最大抑制率达33.45%，比对照提高了156%，丙酮处理的EPS对MG63细胞的抑制率与对照相比呈显著关系（P＜0.05），最大抑制率为20.95%，比对照组提高72.85%。经丙酮和吐温80处理后，虎皮香菇的EPS抗氧化和抗肿瘤活性也有了显著提高，当多糖浓度为10g/L时丙酮处理的EPS羟基自由基清除率为29.26%；当多糖浓度为8g/L时，丙酮处理的EPS · DPPH的清除率达到63.08%，比对照组提高将近2倍。丙酮处理的EPS浓度达到400μg/mL时，与对照组相比显著（P＜0.01），对Hepg 2细胞的抑制率达到22.85%，比对照组提高134%，丙酮处理EPS对MG63细胞的抑制率达到25.29%，比对照组提高135%。
本工作选用常规的测定方法测定两种真菌的抗氧化活性和抗肿瘤活性，添加吐温80和丙酮后两种真菌胞外多糖的抗氧化活性和抗肿瘤能力均有明显提高，具有重要的开发应用价值，其作用机理仍需进一步研究。