20世纪80年代，Heusermann提出在淋巴管壁的中层和内皮细胞显示强烈的5′-核苷酸酶（5′-Nase）活性，而毛细血管壁则明显的低或无；但是，碱性磷酸酶（ALPase）活性则在血管壁呈现强阳性，淋巴管上缺乏。Werner等（1987）根据上述的淋巴管壁和血管壁两种酶活性的差异，应用酶组织化学染色观察了咽的淋巴管；Kato（1990）采用5′-Nase-ALPase双重染色法研究了大鼠舌、胸腺等器官的淋巴管；我们（1992—1998）用5′-Nase-ALPase双重染色法并结合半薄切片和超薄切片研究了家兔和大鼠的胃、肝、胰及舌淋巴管的微细分布。

5′-Nase-ALPase双重染色法可使毛细淋巴管和淋巴管呈棕色或深棕色，而毛细血管和血管则呈现蓝色，根据不同的颜色，两者是很容易区分的（图1-1）。