79 吸光光度法如何选择测量条件？

答：为使测量结果具有较好的灵敏度和准确度，应合理选择吸光度的测量条件，一般从以下四个方面考虑：

（1）测定波长。通常选择有色化合物的最大吸收波长为测定波长，以获得较高的灵敏度。但有时为避免干扰，亦可选择用灵敏度稍低的波长来测定。

（2）测定狭缝的选择。测定狭缝越窄，虽然得到单色光波长范围越窄，分辨率越高，但入射光强度也越弱，势必过大地提高检测器的增益，仪器噪声增大，对测量不利。狭缝过宽，非吸收光的引入将导致测量灵敏度的下降和工作曲线线性关系变差。特别是分析组分较复杂的样品时，可能引入干扰组分的吸收光谱，使选择性变差。不减小吸光度时的最大狭缝宽度，是合适的狭缝宽度。

（3）吸光度的测量范围。由于透过率T 与待测溶液浓度呈负对数关系，因此相同T 的读数误差所造成的浓度误差是不一样的。如果读数误差为1％时，要求浓度测量的相对误差小于5％，则待测溶液的透过率应在70％～10％（吸光度为0.15～1.00）范围内。可以证明，当T＝36.8％（A＝0.434）时，测量的相对误差最小。实际工作中一般控制吸光度读数在0.2～0.7。为达到此目的，一是调节待测溶液浓度，包括称取试样量和稀释倍数；二是选用适当厚度的吸收池；三是在可能的情况下变化入射光波长。

（4）参比溶液的选择。

①当试液、显色剂及所用其他试剂在测定波长都无吸收时，可用纯溶剂（如蒸馏水）作参比溶液。

②当试液无吸收，而显色剂或其他试剂在测定波长处有吸收时，可用不加试样的空白试剂作参比溶液。

③若待测溶液本身在测量波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则采用不加显色剂的空白试样作参比溶液。

④如显色剂和试液在测量波长处都有吸收，可将一份试样溶液加入适当掩蔽剂，将待测组分掩蔽起来，使之不与显色剂反应，然后按相同步骤加入显色剂和其他试剂，所得溶液作参比溶液。