1.3.5　降解石油烃产甲烷的微生物分析方法

近年来，人们越来越认识到油藏内部含有多种菌群^[30～32]，它们分属于不同的菌属，而且在自然状态下就可以降解和利用石油烃，但是单纯利用内源微生物，在自然状态下进行的石油烃降解效率低^[24]。因此，需要从被微生物菌群高度降解的石油培养液中分离能够高效降解石油烃的菌群，然而首先要分析和鉴定这些菌群，尤其是一些难分离培养的菌群。而现有的细菌群落分析技术，如通过聚合酶链式反应（PCR）扩增技术，虽然可以很好地分析微生物的群落结构，但是不能准确地分析哪些菌降解了芳烃，因芳烃是难降解的有机污染物^[164]。用稳定性同位素探针（SIP）如¹³C标记的石油烃和DGGE技术结合就可以准确地分析和鉴定石油烃降解菌群的结构^[165，166]。

利用¹³C标记的和没标记的芳烃分别作为碳源，菌群利用这种碳源合成自身的核酸（DNA），带有¹³C的DNA片段会在氯化铯（CsCl）密度梯度里和其他DNA片段分离，从而鉴别分离出高效芳烃类降解菌。而PCR-DGGE技术也被用于各种微生物群落结构的研究中，如在海洋环境中、土壤环境中、动物肠道中、油藏环境中等^[167～174]，而在油藏中也可以通过研究16S rDNA序列，分析油藏中的菌群结构^[169～176]。除此之外，还有一些新技术也应用在降解石油烃产气研究中，例如qPCR技术、454高通量测序技术、FISH技术等^{[177～190 ]}，通过这些技术可以更好地研究厌氧降解石油烃产气。