上QQ阅读APP看书,第一时间看更新
第二节 样本采集的质量控制
在梅毒的实验室诊断中,样本的质量对于检测的结果至关重要,没有一份合格的临床样本,检验人员无论如何也检测不出一份反映患者真实感染状况的检验报告。因此,临床样本采集与运输的规范化是检测结果准确性的保障。据报道,在临床反馈不满意的检验结果中,有80%的报告为样本质量不符合要求。梅毒的实验室诊断样本采集的质量控制包括梅毒样本采集人员的理论知识水平、样本类型的选择、采集部位选择、采集的量以及运输处理等环节。此外对于样本质量进行评估也是质量控制的重要环节。评估人员必须是独立的、有经验的检验技师。根据样本的评估意见,改进采集的方法,提高检测的质量。
一、样本采集人员的梅毒知识
无论是临床医生、护士或检验技师采集样本,均应经过梅毒实验室诊断技术的专业培训,充分了解梅毒的临床表现与实验室检测的关系,以及不同检测方法对样本的要求。如一期梅毒硬下疳病原体检测优于血清学检测,暗视野检测要求新鲜样本,以保持梅毒螺旋体的活性等。
二、样本类型与采集部位的选择
临床医生应从流行病学、临床表现与患者病史等对患者进行全面系统的分析,依据可疑梅毒的病程或检测目的(筛查与确证)选择适当的样本。如早期梅毒出现皮损时可选择组织液样本,而不适宜选择生殖道分泌物;胎传梅毒应选择新生儿静脉血,而不能选择脐带血;神经梅毒应选择脑脊液等。
梅毒螺旋体在侵入之处繁殖,形成硬下疳样皮损,损害数目多为单个,亦可为多个,好发于外生殖器。男性多发生于阴茎的包皮、冠状沟、龟头或系带上。同性恋男性常发生于肛门直肠部。女性好发生于大阴唇部位,也可发生于子宫颈等处。通过接吻感染者,硬下疳可发生于唇、下颌部和舌等部位,也可发生于眼睑、手指和乳房等处。一期梅毒的硬下疳内含有大量梅毒螺旋体。梅毒螺旋体经淋巴管到达淋巴结后,通过血液循环播散至全身,形成二期梅毒。约70%的患者出现富含梅毒螺旋体的皮疹,如斑疹型梅毒疹(玫瑰疹)、丘疹型梅毒疹、扁平湿疣,约30%的患者有口腔黏膜损害即黏膜斑。之后临床症状暂时隐退进入潜伏梅毒,此时不表现器质性病变,但表现为血清学抗体反应。进入三期梅毒时,螺旋体侵入神经系统、心血管系统及肝、脾、骨骼而引起病变。不同期梅毒的临床症状与样本采集见表5-1。
表5-1 不同期梅毒的临床症状与样本采集
三、检验申请单
检验申请单必须包括患者的所有信息(包括姓名、性别、年龄、门诊或住院号、科别、临床诊断等)以及其他特定的识别号,如初复诊、临床用药情况;要求检测的项目,以及检测项目需附加的信息;申请检测的负责人签名;标本采集类型及采集时间、采集人签名。
四、样本采集
样本采集严格按操作规程执行,并符合生物安全的要求。
梅毒血清学检测的目的通常可分为三类即用于筛查、诊断、疗效及预后观察试验。样本包括全血、血清和血浆。不同的试验适用的样本不同,如血清样本适合于VDRL和USR检测,而血浆样本不适合该试验;血清和血浆样本适合于RPR、TRUST、TPPA和TPHA定性试验,但定量试验最好选择血清样本;快速免疫层析法可使用血清、血浆或全血。
血液标本最好采用真空采血系统,这是保证质量的重要措施之一。目前推广使用真空采血系统可有效避免用错抗凝剂,保证了血与抗凝剂比例,解决了交叉污染,可防止标本溶血和加分离胶加速血清分离等。真空采血系统采集血液后,应轻轻颠倒混匀5~10次,以确保抗凝剂和促凝剂(分离胶)发挥作用。目前常用的抗凝剂有肝素锂(浓度为14.3IU/ml)、EDTA-K 2(浓度为1.5~2.0mg/dl)和枸橼酸钠(浓度为109mmol/L或3.8%),实验室应正确使用相应的抗凝剂,且标本采集时应注意血液与抗凝剂的比例。
病原学检测样本主要为皮损组织液,皮损部位涂抹药物可干扰检测的结果,另采集皮损样本时要尽量避免混入血液、组织碎片或纤维丝影响结果观察。因病原学检测为定性试验,故采集样本应尽可能多。
脑脊液样本检测是诊断神经梅毒的重要手段,CSF样本为无色清澈透明,污染血液的CSF样本可能会影响检测结果。
五、样本送检
标本采集后应尽快从采集现场运送至实验室,采用密闭容器内常温下转移至实验室,长距离运输应采用冰袋或干冰的低温密闭环境下运输。有些检测如果运送距离较远,可能会因分析物的稳定性而影响结果,必要时可采取在检测现场采集,如梅毒螺旋体暗视野检测样本,采集后5~20分钟内必须检查完毕,否则会随着时间的延长而使梅毒螺旋体动力减弱或完全失去动力影响结果观察。送检标本至少包括以下信息:患者姓名、性别、年龄、唯一的样本编号、采集日期、标本类型和检测方法。标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等,要确保分析成分的稳定性,标本管在运送过程中要保持管口封闭,向上垂直放置,避免剧烈振动。
六、样本接收
严格执行患者、化验单及标本收集器皿的核对制度,保证无差错。对检验申请单和样本要认真审核,包括患者详细信息、检验项目、采集时间及采集者的签名等。收集标本应符合检测要求,签收人员应逐一检查标本的质量,避免空管、血少现象或严重污染等,对不合格但可以接受的样本,签收人员记录标本的缺陷并作好临床解释工作,对于诸如空管等不可接受的样本,签收人员应拒绝接受,同时注明拒收原因,并通知临床重新采集标本。
(黄进梅 郑和平)