适用于一期梅毒硬下疳，二期梅毒皮疹、扁平湿疣和早期先天梅毒梅毒疹等。主要用于梅毒病原体的直接形态学检查或基因检测等。

1.钝刃、不锈钢刀或刮勺。

2.载玻片、盖玻片。

3.注射器、12号针头。

4.eppendorf离心管。

5.生理盐水。

6.无菌棉拭子。

7.无菌纱布。

8.无菌乳胶手套。

1.进行暗视野显微镜检查时，用注射器滴加或者是棉签蘸取少许生理盐水滴于载玻片中央（组织液多时可不加盐水）；镀银染色或直接免疫荧光染色时，准备干净载玻片。

2.用生理盐水湿润的无菌棉拭子小心清洗皮损部位，将上面的污物擦去，如有痂皮，可用钝刀除去。

3.穿戴乳胶手套，用拇指和示指从两侧固定皮损处并用手挤压皮损部位，使组织液渗出。

4.用无菌的钝刀或盖玻片轻轻地刮取组织液（避免出血），反复多次，采集足够量的样本。

5.将渗出组织液直接与生理盐水混悬，加盖玻片后立即行暗视野显微镜检查。或将渗出组织液直接涂片、压片，空气中自然干燥后，行镀银染色或直接免疫荧光染色检查梅毒螺旋体。进行核酸检测的样本放入盛有相应的保存液的离心管中。

6.病原学镀银染色或免疫荧光试验样本涂片，室温干燥或丙酮固定后室温保存；用于核酸检测的标本置−70℃保存备用。

1.工作人员必须佩带无菌乳胶手套，无菌操作。

2.皮损部位应先清洁，刮取的组织液应尽量避免血液污染。

3.病原学暗视野检测样本应现场采集现场检测；制备暗视野显微镜检查涂片时，加盖盖玻片应避免气泡产生，并立即送检。

4.样本涂片要均匀一致，大小合适，涂片大小视组织液量而定。

梅毒螺旋体感染后通过皮损侵入腹股沟淋巴结引起淋巴结病。表现为局部淋巴结肿大，无疼痛及压痛，称为梅毒性横痃。淋巴液检查可发现梅毒螺旋体。

1.注射器及12号针头。

2.eppendorf离心管。

3.无菌生理盐水。

4.无菌棉拭子。

5.无菌纱布。

6.无菌乳胶手套。

7.载玻片及盖玻片。

8.3%碘酊。

9.75%酒精。

1.选择适于穿刺的部位，一般取肿大较明显的淋巴结。

2.先用3%碘酊纱球涂擦淋巴结部位皮肤，待干后，再用75%酒精纱球涂擦脱净碘酊。

3.术者以左手示指和拇指固定淋巴结，右手持盛有0.25～0.5mL生理盐水的注射器，以无菌操作将针头直接刺入淋巴结内，穿刺深度依淋巴结大小而定，注入盐水，再吸入注射器内，如此反复2～3次，抽取淋巴液。

4.术后穿刺部位用无菌纱布覆盖，并以胶布固定。

5.固定注射器内栓拔出针头后将注射器取下，充气后再将针头内的抽出液注射到载玻片上，并加盖玻片后，立即行暗视野显微镜检查。或将淋巴液直接涂片，空气中自然干燥后，行镀银染色或直接免疫荧光染色查梅毒螺旋体。进行基因检测的样本放入盛有相应的保存液的离心管中。

6.病原学镀银染色或免疫荧光试验样本涂片，室温干燥或丙酮固定后室温保存；用于核酸检测的标本置−70℃保存备用。

1.最好在饭前穿刺，以免抽出物中含脂质过多，影响结果。

2.若未能获得抽出物时，可将针头再由原穿刺点刺入，并可在不同方向连续穿刺，抽吸数次，只要不发生出血直到取得抽出物为止。

3.选择易于固定的部位，淋巴结不宜过小，且应远离大血管。

4.制备暗视野显微镜检查涂片时，加盖盖玻片应避免气泡产生，并立即送检。

5.样本涂片要均匀一致。

梅毒妊娠妇女可通过胎盘将梅毒螺旋体经羊水传染给胎儿。梅毒妊娠妇女的羊膜穿刺术应由专业人员操作。适合中期妊娠的产前诊断。羊水存在于羊膜腔内，受精卵于受精第七天形成羊膜腔，开始产生羊水，妊娠12周时羊水量为50ml，20周时为400ml，36～38周时为1000～1500ml，接近预产期羊水量稍有下降。

1.注射器及20或22号针头。

2.eppendorf离心管。

3.无菌布单。

4.无菌棉拭子。

5.无菌纱布。

6.无菌乳胶手套。

7.载玻片及盖片。

8.3%碘酊。

9.75%酒精。

1.正式抽取羊水之前，医师先帮妊娠妇女做超声波检查，决定胎儿大小、妊娠周数、胎儿位置及胎儿数目。

2.找出最适合下针的位置。

3.消毒妊娠妇女皮肤，在妊娠妇女的肚皮上铺上无菌单。

4.以20或22号脊椎穿刺针在超声波的引导下，逐步刺入选定的羊膜腔内。

5.确定穿刺针已在羊膜腔内，开始以负压将羊水抽出。

6.前面2ml的羊水必须丢弃（防污染），抽取大约20ml的羊水。

7.将穿刺针的内管置回，回抽整支穿刺针。

8.在肚皮的针孔上贴上绷带，并稍坐休息观察。

9.固定注射器内栓拔出针头后将注射器取下，充气后再将针头内的抽出液注射到载玻片上，并加盖玻片后，立即行暗视野显微镜检查；或将抽出羊水直接涂片，空气中自然干燥后，进行镀银染色或直接免疫荧光染色查梅毒螺旋体；进行核酸检测的样本放入盛有相应的保存液的离心管中。

10.病原学镀银染色或免疫荧光试验样本涂片，室温干燥或丙酮固定后室温保存；用于核酸检测的标本置−70℃保存备用。

1.使用穿刺包一定要按无菌要求消毒穿刺点，沿管壁缓缓注入无菌离心管，用无菌封口封好。

2.对于孕期合适妊娠妇女，要采用B超探查来确定腹部穿刺点，一般选择羊水多且无胎儿肢体处，或者在B超的监测下实施穿刺。

3.穿刺羊水前，可以让妊娠妇女卧床上连续翻转五次体位以上，从而使子宫内羊水中的胎儿细胞悬浮起来，方便穿刺。

4.将细胞悬液1ml装到准备好的1.5ml无菌封口的塑料离心管内，注意密封，用于基因测试。

5.进行暗视野检测梅毒螺旋体的羊水，抽取后立即送检，以保证梅毒螺旋体活力。

随着一期梅毒的进展，感染机体逐渐产生梅毒螺旋体特异性抗体与非梅毒螺旋体抗体（反应素）；随着梅毒的治疗，机体又表现出不同的抗体谱变化。梅毒血清学检测可用于梅毒的诊断与疗效评估。

1.10ml注射器及针头。

2.止血带。

3.真空采血管或真空抗凝采血管。

4.无菌棉拭子。

5.无菌纱布。

6.无菌乳胶手套。

7.3%碘酊。

8.75%酒精。

1.在试管上贴上标签，注明患者姓名、项目名称、采集日期、门诊或住院号、条形码等。

2.采血前，操作人员应先清洁双手（用肥皂或消毒液，七步洗手法），戴口罩和手套。

3.要求受检者坐在实验台前，将前臂放在实验台上，掌心向上，并在肘下放一枕垫。卧床受检者要求前臂伸展，暴露穿刺部位。常用采血位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。

4.打开一次性注射器包装，左手持针头下座，右手持针筒，将针头和针筒紧密连接，并使针头斜面对准针筒刻度，抽拉针栓检查有无阻塞和漏气。最后排尽注射器中的空气，备用。使用前，保持针头无菌状态。

5.在采血部位上端约6cm处，将止血带绕手臂一圈打一活结，止血带末端向上。要求患者紧握和放松拳头几次，使静脉隆起。止血带应能减缓远端静脉血液回流，但又不能紧到压迫动脉血流。

6.选择进针部位，采用左手示指，触摸进针部位的静脉。

7.用3.0%碘酊棉签自所选静脉穿刺点从内向外，顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥发后，再用75%酒精棉签以同样的方式拭去碘酊，待干。

8.取下针头无菌冒，以左手拇指固定静脉穿刺部位下端，右手持注射器，示指固定针头下座。保持针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤，然后成5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔。确认穿刺入静脉中心位置，并沿着静脉走向将针头推入10～15mm。

9.用左手缓缓向后拉注射器针栓，见少量回血后，松开止血带。然后，向后拉针栓到达采血量刻度。若使用一次性真空采血装置，当针头进入血管后会见少量回血，将真空采血管插入试管托内采血针中，因试管内负压作用，血液自动流入试管，到达采血量刻度后拔出试管即可。

10.嘱受检者松拳，用消毒棉签压住进针部位，迅速向后拔出针头。用消毒棉签按压进针部位并嘱受检者继续按住消毒棉签5～10分钟。

11.从注射器上取下针头。将血液沿试管壁缓缓注入，到达标记处。含抗凝剂试管需迅速轻轻颠倒混匀几次。

1.采血前应向患者耐心解释，以消除不必要的凝虑和恐惧心理。如遇个别患者进针时或采血后发生眩晕，应立即拔出针头让其平卧休息片刻，即可恢复。必要时可给患者嗅吸芳香酊、针刺（或拇指按掐）人中和合谷等穴位。若因低血糖诱发眩晕，可立即静注葡萄糖或嘱患者服糖水即可。如有其他情况，应立即找医生共同处理。

2.根据试验需要选择不同试管或不同采血试管。

3.如果肥胖患者的静脉暴露不明显，可以示指经碘酊、乙醇消毒后，在采血部位触摸，发现静脉走向后凭手感方向与深度试探性穿刺。

4.静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固，针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严重后果。

5.采静脉血时止血带压迫时间不能过长、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩，最好不超过1分钟。

6.血液加入抗凝试管中应与抗凝剂充分混匀达到抗凝目的；不需要抗凝时则将血液直接注入试管中。防止血液标本溶血，造成溶血的原因有：注射器和容器不干燥、不清洁；压脉带捆扎时间太久，淤血时间长；穿刺过程中损伤组织过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或用力推出时产生大量气泡；抗凝血用力振荡；离心时速度过快等。

7.颠倒混匀时，切忌振荡试管，以防止溶血和泡沫产生。

8.血液样本采集后应尽快送检，一般应于采血后2小时内分离出血清或血浆。

梅毒螺旋体可经过血-脑屏障侵犯神经系统出现脑膜、大脑、血管或脊髓等损害的一组临床综合征。脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）样本可进行梅毒血清学与病原学试验。样本采集应由专业人员采用腰椎穿刺术获得。

1.骨髓穿刺针。

2.一次性垫巾。

3.复合碘消毒液。

4.2%利多卡因。

5.血管钳。

6.无菌洞巾。

7.无菌纱布。

8.无菌棉签。

9.无菌试管。

10.eppendorf离心管。

11.口罩等。

1.受检者侧卧于硬板床，背部与床面垂直，两手抱膝紧贴腹部，头向前胸屈曲，使躯干呈弓形，以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点，相当于第3～4腰椎棘突间隙。

2.常规消毒处理后，用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。

3.术者用左手固定穿刺皮肤，右手持穿刺针以垂直背部方向缓缓刺入，针尖稍斜向头部，成人进针深度约4～6cm，儿童约2～4cm。

4.当针头穿过韧带与硬脑膜时，有阻力突然消失落空感。

5.此时可将针芯慢慢抽出，即可见CSF流出，收集于无菌的容器中，备用。

6.术毕，将针芯插入后一起拔出穿刺针，覆盖消毒纱布，用胶布固定。

7.术后患者去枕俯卧（如有困难则平卧）4～6小时，以免引起术后低颅压头痛。

1.嘱患者侧卧于硬板床上，背部与床面垂直，头向前胸部屈曲，两手抱膝紧贴腹部，使躯干呈弓形；或由助手在术者对面用一手抱住患者头部，另一手挽住双下肢国窝处并用力抱紧，使脊柱昼量后凸以增宽椎间隙，便于进针。

2.确定穿刺点，以骼后上棘连线与后正中线的交会处为穿刺点，一般取第3～4腰椎棘突间隙，有时也可在上一或下一腰椎间隙进行。

3.当针头穿过韧带与硬脑膜时，可感到阻力突然消失有落空感。此时可将针芯慢慢抽出，以防脑脊液迅速流出，造成脑疝。

4.在放液前先接上测压管测量压力。正常侧卧位脑脊液压力为0.69～1.764kPa或40～50滴/分钟。若了解蛛网膜下腔有无阻塞，可做Queckenstedt试验。即在测定初压后，由助手先压迫一侧颈静脉约10秒，然后再压另一侧，最后同时按压双侧颈静脉；正常时压迫颈静脉后，脑脊液压力立即迅速升高一倍左右，解除压迫后10～20秒，迅速降至原来水平，称为梗阻试验阴性，表示蛛网膜下腔通畅。若压迫颈静脉后，不能使脑脊液压力升高，则为梗阴试验阳性，表示蛛网膜下腔完全阻塞；若施压后压力缓慢上升，放松后又缓慢下降，表示有不完全阻塞。凡颅内压增高者，禁作此试验。

5.收集脑脊液2～5ml，一般分1、2、3管送检；如需作培养时，应用无菌操作法留标本。CSF样品在4小时内检测，可置室温存放；5个工作日内检测，可置2～8℃存放；否则应置−20℃或以下保存，冻存样本应避免反复冻融。

选择典型皮损进行皮肤组织活检，明确取材部位后，可采用割切法或钻孔法取材，临床上常用割切法。用于组织病理学及病原体检测。

1.灭菌手术刀。

2.灭菌剪刀。

3.一次性垫巾。

4.复合碘消毒液。

5.2%利多卡因。

6.消毒镊子。

7.无菌洞巾。

8.无菌纱布。

9.无菌棉签。

10.缝合针线。

11.无菌试管。

12.eppendorf离心管。

13.口罩等。

醉按外科消毒法进行局部消毒，待酒精干后，用2%利多卡因注射液（最好内含0.001%的肾上腺素），在要切取的标本外围作环形浸润麻醉，为1～2ml，针尖勿刺入要取材的标本内，以免造成组织水肿及破损。然后铺上消毒孔巾，待2～3分钟，使麻醉剂充分发生作用。

左手示指和拇指将皮肤稍微张开，用灭菌手术刀作两条半月形的切口，标本应长10mm，宽4～5mm，深达皮下脂肪层，标本纵轴应与皮纹平行，切口与皮面成直角，使标本上下宽度均等。然后用灭菌镊子轻轻将标本一端提起，用手术刀或剪刀将附着的组织切断，标本应带脂肪组织。若要作两种切片检查时，则切取的标本应稍大些，采下后用利刀片将其分成两半。

用5mm钻孔器取材，如需要将组织分成两份分别做活检者，则用6mm钻孔器。常规消毒、麻醉。然后将钻孔器紧贴在活检部位扭转，使钻孔器深入至皮下脂肪组织后，拔出钻孔器，用缝针或小镊子轻轻提起组织，用剪刀将附着的皮下脂肪组织切断。

为保持组织和细胞的形态和特征，防止组织自溶。当组织离体后，应立即放入已盛有5～8ml的10%中性甲醛溶液的小瓶内，并把小瓶轻摇两下混匀防止标本与容器底部粘连。

用消毒镊子将皮肤切口吻合，缝合1～2针，然后用75%酒精消毒伤口，盖上消毒纱布，包扎。嘱患者保护伤口清洁，避免污染，5～7天拆线。

1.术后应保持创口清洁，防止污染，必要时更换敷料。

2.活检组织要够宽够长，尽量达0.5cm×1.0cm，并且最好上下一样宽。取材时应尽量包括达皮下脂肪层的皮肤各层组织，不能过浅。并应同时取一部分正常皮肤，以便与病变组织作对照。结节、囊肿性病变不能单独取材，水疱、脓疱要防止破损。

3.不能用力钳夹挤压病变组织。

4.注意无菌操作，避免交叉感染。特别是在对疑为传染性疾病的取材时尤应注意。