24.如何控制液体菌种培养中的污染

液体菌种培养中，污染及其控制的主要渠道有以下几个方面。

（1）接种环节　由于目前的设备尚不完善（亦无相关国家强制性标准可以执行），接种还是“火圈接种法”，因此，人为操作的随意性、不确切性以及随机性很强，包括火焰的大小、盖火的时机、接种动作的麻利程度以及种源三角瓶的洁净度等，都是很重要的污染渠道。一般规范操作应该包括以下几点：

第一，75%酒精棉球擦净三角瓶，尤其瓶颈部位是表面消毒的重点，并在接种前短时内揭开扎口。

第二，调整火圈。一般火圈的圈内最小直径应大于接种孔的罗盖2厘米左右，不得太小，否则，套不住接种孔。

第三，酒精消毒罗盖后，随即开启，即将打开时，点燃火圈，在取下罗盖的瞬间将火圈套入。

第四，接种动作要快，但不要将种源倒在罗口上。

第五，完成接种后，先将罗盖压在罗口上，再拿掉并灭掉火圈，随即紧住罗盖即可。

注意要点：两人的配合应当很默契，如果火圈火力变小，应及时使用注射器给火圈注入酒精。

（2）气路　很多情况下，气路是主要的污染途径之一。原因一是灭菌时没有打开气路管道通入蒸汽，或时间过短；二是进入的空气过滤不足，或级次偏低，使得进入培养罐的空气含有杂菌。此外，培养室的不洁净也是重要原因之一。控制的措施为：首先，确保过滤器有足够的级数；其次，空消时，打开各气路阀门，并保证足够的灭菌时间；再次，完成灭菌后，随即打开吹风使之吹干；第四，培养室在使用前、清理卫生后，连续喷洒300倍百病傻和赛百09溶液各一遍。

（3）管路　管路间连接螺栓的松动或损坏，该类事件时有发生。所以，自空消开始前，即应逐个检查，发现问题及时更换。

（4）种源携带污染　这是个不应该发生的低级错误。