三、常规HIV抗体检测方法及结果解释

（一）常规HIV抗体检测方法

1.HIV筛查方法

（1）化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）：

将酶或发光物质标记在HIV抗原或抗体上，加入待测样本后经抗原抗体免疫反应，再与加入的氧化剂或酶底物反应而使抗原抗体复合物产生光信号，通过测量其发光强度，从而确定待测物的浓度。发光免疫分析作为一种非放射性免疫标记技术，除了具有高灵敏性、高特异性、标记物稳定等特点外，其检测过程简便、快速、自动化，并且检测整个过程处于封闭式，最大可能地减少外部污染的概率。目前临床医疗机构广泛使用该方法进行HIV抗体检测。

（2）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）：

在固相支持物上包被HIV抗原/抗体，如果待测血浆（清）中存在HIV 抗体/抗原，则抗体可与包被的HIV 抗原/抗体结合形成抗原-抗体复合物，通过洗板去掉未结合的非特异性成分和多余的抗体/抗原，加入酶标记的HIV抗原/抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗原复合物，洗去未形成复合物的酶标记抗原后加入显色剂进行显色，而阴性样本由于缺乏HIV抗体/抗原而无法形成可以催化底物显色的复合物，因此可以通过显色来判断样本是否存在HIV抗体/抗原。ELISA是最常用的HIV抗体筛查试验。

（3）快速检测（rapid test，RT）：

主要包括免疫层析试验、明胶颗粒凝集试验和免疫渗滤试验。主要原理是以硝酸纤维膜为载体，HIV 抗原线状固定在膜上，待检样本沿着固相载体迁移或滤过，若样本中含有HIV抗体，HIV抗体即与标记于胶体金（或胶体硒）上的HIV抗原反应形成抗原-抗体复合物，并产生肉眼可见的聚集线或凝集；若样本中不含有抗HIV的抗体，则不能形成复合物，亦不能被包被线上抗原俘获，形成不了可见的聚集线或凝集。快速检测试验适用于门诊检测、急诊检测、应急检测、哨点监测等，检测时间短（15～30min）、操作简便快速、不需要特殊仪器设备。

2.HIV抗体确证试验

（1）蛋白印迹法（Western blotting，WB）：

是HIV确证试验中最常用的方法，具有较高的特异性，因此用于HIV抗体筛查有反应的样本进行确证。蛋白印迹法的原理是通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的病毒蛋白带分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一膜条上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。待测样本经适当稀释后，加至硝酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应，血清中若含有HIV抗体，就会与膜条上抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，根据出现条带的条数及位置，参照试剂盒说明书及相应标准，判断待测样本为阳性、阴性或不确定。

（2）条带/线性免疫试验（strip immunoblot assay/line immunoassay，SIA/LIA）：

采用间接法检测样本中的抗HIV-1/HIV-2特异性抗体。试剂盒的膜条上包被HIV-1/HIV-2不同的重组抗原片段，加入待测样本后，其中的相应抗体与抗原发生特异性免疫反应；随后加入羊抗人IgG与HIV特异性IgG抗体相结合；加入显色底物后，在碱性磷酸酶的催化下，特异性抗体的结合部位出现肉眼可见的条带，按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样本为阳性、阴性或不确定。

（二）HIV抗体检测结果解释

对筛查实验室上送的待确证样本进行信息核对，进行HIV抗体确证试验。若HIV抗体确证试验结果判读为阴性，报告“HIV 抗体阴性”，如果被检者有流行病学史，需要在2～4周后随访，或进行HIV-1核酸检测；若试验结果判读为阳性，则报告“HIV1 抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告；若试验结果判断为不确定，报告“HIV 抗体不确定”，建议对“HIV 抗体不确定”者进行HIV-1核酸试验或2～4周后随访。如果使用HIV1+2抗体确证试剂，出现HIV-2 指示带，根据具体情况决定是否进一步检测 HIV-2：①HIV-1抗体阳性，报告HIV-1 抗体阳性，不推荐再检测HIV-2；②HIV-1 抗体不确定或阴性，需再用单纯的HIV-2 抗体确证试剂或能区分HIV-1与HIV-2感染的确证试剂检测。抗体确证试验流程见图2-5。

图2-5　蛋白印迹法和条带/线性免疫试验流程

*.两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂或两种不同试剂。

#.疑似“窗口期”感染，建议进一步做 HIV 核酸检测或 2～4 周后随访。