第1章 临床基础检验学技术
第1节 血液样本采集和血涂片制备
考纲要求
①血液的组成及其理化性质；②静脉采血法、皮肤采血法和真空采血法；③抗凝剂的选择；④血涂片的制备与染色。
复习要点
一、血液的生理概要
1.血液的组成★★
血液由血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆组成。血液离体自然凝固而分离出的淡黄色透明液体称为血清。血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色透明液体称为血浆。血清与血浆相比，血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、凝血因子Ⅱ（凝血酶原）、凝血因子Ⅴ、凝血因子Ⅷ等。
2.血液的理化性质★
（1）血量 正常人血量约为（70±10）mL/kg体重，成人4～5L，占体重的6%～8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。小儿血量与体重之比略高于成人，男性高于女性，但女性妊娠期间血量可增加23%～25%。
（2）颜色 动脉血氧合血红蛋白较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色。
（3）酸碱度 正常血液的pH为7.35～7.45。
（4）比密 正常男性为1.055～1.063，女性为1.051～1.060，相对黏度为4～5；血浆比密为1.025～1.030；血细胞比密为1.090。
（5）血浆渗透压 正常人为290～310mOsm/（kg·H2O）。
3.血液的特性★
（1）细胞的悬浮稳定性 正常人血液中红细胞呈均匀混悬状态，与红细胞表面的唾液酸根、正常血浆成分、血浆黏度和血流动力学等有关。
（2）黏滞性 正常人全血黏度约为生理盐水黏度的4～5倍；血浆黏度约为生理盐水的1.6倍。血液黏度与血细胞比容和血浆黏度有关，受血浆中纤维蛋白原和球蛋白等大分子蛋白质的影响，它们的浓度越高，血浆黏度越高；血管内壁和血流动力学亦可影响血液黏度。
（3）凝固性 血液离体后，数分钟内便可自行凝固，是凝血因子被激活的结果。
4.血液的生理功能★★
（1）运输功能 血液可将氧气和各种营养成分运送到全身各个组织和器官，同时将各种代谢产物通过血液输送到肺、肾等器官再排到体外。
（2）协调功能 将各种激素、酶类运到相关组织器官，以协调全身各组织器官的活动。
（3）维护机体内环境稳定 通过血液循环维持体内水电解质平衡、酸碱平衡、体温恒定。
（4）防御功能 血液中白细胞、抗体、补体、血小板、凝血因子具有止血和凝血作用。
二、血液标本的采集
1.静脉采血法★★
（1）普通静脉采血 成人静脉采血以肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉为主。小儿也可从颈外静脉采血，但操作有危险性，少用为宜。
（2）真空采血法 真空采血法又称为负压采血法。真空采血装置有套筒式和头皮静脉式两种，能有效避免医护人员和患者间交叉感染。各种真空定量采血容器，根据需要标有不同的色码，适用于不同的检验项目。
2.皮肤采血法★★
皮肤采血法又称毛细血管采血法，是采集微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，同时含细胞间质和细胞内液。采血部位通常为耳垂或手指，手指采血比耳垂采血检测结果稳定，耳垂血红细胞、血红蛋白的测定结果比手指血高，耳垂和手指端采血均禁忌用力挤压，耳垂和指端采血均需穿刺足够深度。世界卫生组织（WHO）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集拇指或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者可选择皮肤完整处采血。
3.方法学评价★★
（1）皮肤采血 皮肤采血简便、快速、经济，但容易发生溶血、凝血或混入组织液，从而影响检查结果。
（2）静脉采血 静脉开放式釆血法的操作环节多，难以规范统一，在移液和丢弃注射器时可能造成血液污染；静脉封闭式采血法的操作规范有利于样本收集运送和保存，可防止院内血源性传染病。
4.质量控制★★★
（1）患者的生理状态和饮食的影响 患者活动情况、精神状态、药物、年龄、性别、种族、样本采集时间、吸烟、季节等都会影响检测结果。
（2）采血操作对检验结果的影响 采血时间、部位、体位、止血带捆扎时间（小于1min）、输液、溶血、脂血等。
（3）其他 样本运输、保存和处理的影响。
三、抗凝剂的选择★★★
抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中某些凝血因子的活性，阻止血液凝固。常用的抗凝剂有以下5种。
（1）乙二胺四乙酸（EDTA）盐 EDTA能与血液中的Ca2+结合形成螯合物，使Ca2+失去凝血作用。其用量为EDTA-K2·2H2O 1.5～2.2mg/mL血液，根据国际血液学标准化委员会（ICSH）的建议，血细胞计数的抗凝剂为EDTA-K2，但不适用于凝血检查和血小板功能试验。
（2）草酸盐 溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血作用。2mg草酸盐可抗凝1mL的血液，但不适用于凝血检查。草酸盐浓度过高会导致溶血、改变血液pH，干扰血浆钾、钠、氯和某些酶活性的测定。
（3）双草酸盐 适用于血细胞比容、血细胞计数（CBC）、网织红细胞计数等检查，不适用于血小板计数、白细胞分类计数。
（4）肝素 肝素阻止凝血酶的形成和血小板的聚集，是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂，但不适用于细胞形态学检查，常用于血气分析、血氨检查的抗凝。每毫升血液肝素用量为（15±2.5）U/mL，多为肝素钠盐或钾盐。
（5）枸橼酸盐 枸橼酸盐能与血液中Ca2+结合形成螯合物，阻止血液凝固。枸橼酸盐抗凝剂的抗凝作用不如上述抗凝剂。枸橼酸钠与血液的抗凝比值为1.9或1.4。适用于凝血功能、红细胞沉降率（ESR，血沉）的检查，是输血保养液的主要抗凝成分。
四、血液涂片制备
1.载玻片的清洁★★
制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度，新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗，已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂的水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。载玻片应清洁、干燥、中性、无油腻。
2.血涂片的制备★★
（1）手工推片法 血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容是影响涂片厚薄的因素。一张良好的血片，应厚薄适宜、头体尾明显、细胞分布均匀、血膜边缘整齐并留有一定空隙。血滴愈大、角度愈大、推片速度愈快，血膜愈厚，反之则愈薄。
（2）仪器自动涂片法 主要用于自动化血液分析仪。
3.质量控制★★
制备血涂片时，血细胞比容增高、血液黏度较高时，应采用小血滴、小角度、慢推的方法进行；血细胞比容减低、血液较稀时，应采用大血滴、大角度、快推的方法进行，方可获得满意结果。
五、血液细胞染色
1.瑞氏染色法★★
（1）瑞氏染料的组成 将适量的碱性亚甲蓝与酸性伊红溶于甲醇中。甲醇的作用，一是溶解亚甲蓝和伊红，二是固定细胞形态。
（2）瑞氏染色的原理 既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，会被染成不同颜色。
（3）影响因素 染色深浅与染液pH（最适pH为6.4～6.8）、细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度有关，偏酸性环境易与伊红结合，使红细胞、嗜酸粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色，偏碱性环境易与亚甲蓝结合，使细胞染色呈灰蓝色，嗜酸性颗粒呈暗褐色或棕黑色，中性颗粒偏粗呈紫黑色。
2.吉姆萨染色法★★
（1）吉姆萨染料的组成 吉姆萨染料由天青、伊红、甲醇和纯甘油组成。甘油的作用是防止甲醇挥发。
（2）吉姆萨染色的原理 既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，会被染成不同颜色。
（3）注意事项 血涂片需先用甲醇固定3～5min；吉姆萨染液染色前，用磷酸盐缓冲液（pH 6.4～6.8）稀释吉姆萨染料10～20倍；浸染10～30min。
3.方法学评价★★
瑞氏染色是最常用的细胞染色方法，尤其对细胞质成分、中性颗粒染色效果好，但对细胞核的着色能力略差。吉姆萨染液对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）着色较好，但对细胞质成分的着色能力略差。采用瑞氏-吉姆萨复合染液可使细胞胞质、颗粒、细胞核等均获得满意的染色效果。
4.质量控制★★★
血细胞染色过深或过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH密切相关。染色过深时纠正的方法是缩短染色时间、稀释染液、调节pH；染色过浅纠正方法是延长染色时间、调节pH。
考题回顾与同步练习
【例1】血清与血浆的主要区别是
A.血清中无凝血因子Ⅰ B.血清中无钙离子 C.血清中无镁离子 D.血清中钠离子水平低 E.血清是全血经抗凝后而获得
【例2】成人静脉采血的最佳部位是
A.手背静脉 B.外踝静脉 C.股静脉 D.腘静脉 E.肘部静脉
【例3】关于指端采血与耳垂采血的叙述，错误的是
A.指端采血比耳垂采血检测结果稳定 B.耳垂血红细胞、血红蛋白的测定结果比指端血高 C.指端血红细胞、血红蛋白的测定结果与耳垂血几乎无差异 D.耳垂和指端采血均禁忌用力挤压 E.耳垂和指端采血均需穿刺足够深度
【例4】关于采血的叙述正确的是
A.皮肤采血缺点是易于溶血、凝血或混入组织液 B.采血时患者情况不会影响结果 C.血清中无镁离子 D.容器不洁不会引起溶血 E.样本保存不当不影响结果
【例5】不能与Ca2+作用但能阻止血液凝固的抗凝剂是
A.EDTA-K2 B.EDTA-Na2 C.枸橼酸钠 D.肝素 E.草酸盐
【例6】用于观察细胞核和寄生虫的首选染色方法是
A.瑞氏染色 B.巴氏染色 C.吉姆萨染色 D.抗酸染色 E.瑞氏-吉姆萨复合染色
【例7】瑞氏染色中缓冲液最主要的作用是
A.稀释染液以防着色太深 B.不改变细胞所带电荷，促进染色进行 C.增加细胞对染料的亲和力 D.保证细胞受色时恒定最佳的pH条件 E.稀释染液，便于控制染色时间
【例8】下列关于瑞氏染色的叙述，正确的是
A.瑞氏染色的最适pH为6～7 B.染液配制后可立即使用 C.染色时间不受室温影响 D.缓冲液pH偏高，血涂片颜色会偏蓝 E.瑞氏染料中含酸性染料亚甲蓝和碱性染料伊红
【例9】下列哪项试验所用的标本不能用肝素抗凝
A.血常规测定 B.血气分析 C.血氨测定 D.抗凝血酶Ⅲ测定 E.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验
【例10】关于真空采血法的叙述，错误的是
A.又称负压采血法 B.更易发生溶血现象 C.真空采血为封闭式 D.可避免对医护人员的感染 E.目前有套筒式和头皮静脉式两种
参考答案
1.A 2.E 3.C 4.A 5.D 6.C 7.D 8.D 9.D 10.B