第4节 血细胞化学染色的临床应用
考纲要求
①常用血细胞化学染色的原理及方法，包括过氧化酶染色（POX）、过碘酸希夫（PAS）反应、碱性磷酸酶染色（NAP）、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-D-CE）、α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）、醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NAE）、碱性α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）、酸性磷酸酶染色（ACP）和铁染色；②血细胞化学染色的临床应用。
复习要点
一、过氧化酶染色
1.原理★★
血细胞内的过氧化酶分解H2O2，释出新生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞质内。
2.结果判断★★
胞质中无蓝黑色颗粒者为阴性反应；出现细小颗粒、分布稀疏者为弱阳性反应；颗粒粗大而密集者为强阳性反应。
3.正常血细胞的染色反应★★
嗜酸粒细胞为强阳性，单核细胞系统呈阴性或弱阳性。淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核细胞系统、嗜碱粒细胞、浆细胞、组织细胞呈阴性。
4.临床意义★★★
（1）急性粒细胞白血病时，白血病细胞多呈强阳性反应；急性单核细胞白血病时呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴细胞白血病，原始和幼淋巴细胞则呈阴性反应。
（2）小型原始粒细胞和原始淋巴细胞区分时，POX阳性者为小型原始粒细胞，阴性者为原始淋巴细胞。
（3）急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别时，急性早幼粒细胞白血病的白血病细胞呈强阳性反应。
（4）异常组织细胞的POX呈阴性反应，白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。
二、过碘酸希夫反应
1.原理★★
过碘酸能将血细胞内的糖类物质氧化生成醛基，醛基与希夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物。
2.结果判断★★
胞质中出现红色颗粒、块状或呈弥漫状红色为阳性反应。
3.正常血细胞的染色反应★★
（1）原粒细胞为阴性反应，自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，随着细胞的成熟，阳性反应程度渐增强。
（2）嗜酸粒细胞中颗粒本身不着色，颗粒之间的胞质呈红色；嗜碱粒细胞中的嗜碱颗粒呈阳性。
（3）幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。
（4）单核细胞、巨核细胞和血小板呈阳性反应。
（5）淋巴细胞大多呈阴性反应，少数呈弱阳性反应；浆细胞一般为阴性。
4.临床意义★★★
（1）红细胞系统
①红血病或红白血病以及骨髓增生异常综合征时，幼红细胞可呈阳性反应。
②巨幼细胞贫血、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等疾病时，幼红细胞为阴性反应。
（2）白细胞系统
①急性淋巴细胞白血病时，白血病性原始淋巴细胞的阳性反应物质为红色块状或粗颗粒状，底色不红。
②急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞的阳性反应物质呈均匀分布的红色或红色细颗粒状。
③急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞的阳性反应物质呈红色细颗粒状，弥散分布。
（3）其他细胞
①帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞或里-施细胞，前者呈强阳性反应，后者呈阴性或弱阳性反应。
②帮助鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者呈强阳性反应，后者呈阴性或弱阳性反应。
③帮助鉴别白血病细胞和腺癌骨髓转移的腺癌细胞，后者呈强阳性反应。
三、碱性磷酸酶染色
1.原理★★
偶氮偶联法：中性粒细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4～9.6的条件下，将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解，产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之处。
2.结果判断★★
①胞质无灰褐色沉淀为“-”。
②胞质出现灰褐色沉淀为“+”。
③胞质深褐色沉淀为“++”。
④胞质基本充满棕黑色颗粒状沉淀，但密度较低为“+++”。
⑤胞质全被深黑色团块沉淀所充满，密度高为“++++”。
3.正常血细胞的染色反应★★
除中性粒细胞可呈阳性反应外，其他血细胞均呈阴性反应。
4.临床意义★★★
（1）生理变化 NAP活性可因年龄、性别、应激状态、月经周期、妊娠及分娩等因素影响，有一定的生理性变化。
（2）病理性变化 NAP积分增加见于细菌性感染、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、骨髓纤维化、原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、慢性中性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、再生障碍性贫血、骨髓转移癌、肾上腺皮质激素及雌雄激素治疗后等。NAP积分降低见于慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、骨髓增生异常综合征、恶性组织细胞病等。
（3）疾病的鉴别
①慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别 前者NAP积分明显降低，后者NAP积分明显增加。
②慢性粒细胞白血病（慢性期）与慢性中性粒细胞白血病鉴别 前者NAP积分明显降低，后者NAP积分明显增加。
③再生障碍性贫血与阵发性睡眠性血红蛋白尿症的鉴别 前者NAP积分常增高，后者NAP积分常下降。
④急性白血病的鉴别 急性粒细胞白血病和急性单核细胞白血病，NAP积分值一般减低，急性淋巴细胞白血病时NAP积分值常增高。
⑤细菌性感染与病毒性感染的鉴别 前者NAP积分明显降低，后者一般无明显变化。
⑥真性红细胞增多症与继发性红细胞增多症的鉴别 前者NAP积分常增高，后者一般无明显变化。
⑦恶性淋巴瘤与恶性组织细胞病的鉴别 前者NAP积分常增高，后者常下降。
⑧原发性血小板增多症与继发性血小板增多症的鉴别 前者NAP积分常增高，后者一般无明显变化。
⑨恶性组织细胞病与反应性组织细胞增多症的鉴别 前者NAP积分常下降，后者一般无明显变化。
四、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
1.原理★★
血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，进而与基质液中的坚重氮盐（常用坚牢紫酱GBC）偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内。氯乙酸AS-D萘酚酯酶几乎仅出现于粒细胞，其特异性高，因此又称为粒细胞脂酶。
2.结果判断★★
①胞质无色为“-”。
②胞质呈淡红色为“+”。
③鲜红色沉淀布满胞质为“++”。
④深红色沉淀充满胞质为“++”。
3.正常血细胞的染色反应★★
（1）粒细胞系统 原粒细胞为阴性或弱阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，以早幼粒和中幼粒细胞阳性反应最强，但酶活性并不随着细胞的成熟而增强，反而是逐渐减弱；嗜酸粒细胞为阴性或弱阳性反应；嗜碱粒细胞为阳性反应。氯乙酸AS-D萘酚酯酶几乎只出现在粒细胞中，其特异性高，又称“粒细胞酶”或“特异性酶”。
（2）其他血细胞 单核细胞为阴性反应，个别可呈弱阳性反应；淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞和血小板均呈阴性反应。
4.临床意义★★★
①急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可出现阳性反应。
②急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病时，白血病细胞均呈阴性反应。
③急性粒-单核细胞白血病时，原粒和早幼粒细胞呈阳性反应，原始单核和幼单核细胞呈阴性反应。
五、α-醋酸萘酚酯酶染色
1.原理★★
血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，萘酚再与重氮染料（常用坚牢蓝B）偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。
2.结果判断★★
胞质中出现棕黑色颗粒样沉淀为阳性结果。
3.正常血细胞的染色反应★★
①原单核细胞为阴性或弱阳性反应，幼单核细胞和单核细胞呈阳性反应，单核系细胞的阳性反应可被氟化钠抑制。
②粒细胞系统和淋巴细胞系统一般为阴性或弱阳性反应，阳性反应不能被氟化钠抑制。
③幼红细胞为阴性或弱阳性，阳性反应不被氟化钠抑制。
④巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应不被氟化钠抑制。
4.临床意义★★★
①急性单核细胞白血病细胞呈强阳性反应，单核细胞中的酶活性可被氟化钠抑制。
②急性粒细胞白血病时，原粒细胞呈阴性或个别阳性反应，阳性反应不被氟化钠抑制。
③急性早幼粒细胞白血病时，早幼粒细胞呈强阳性，阳性反应不被氟化钠抑制。
④急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时可出现阳性反应。
⑤急性粒单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制。
六、醋酸AS-D萘酚酯酶染色
1.原理★★
血细胞内醋酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的醋酸AS-D萘酚水解，产生AS-D萘酚，进而与基质液中的重氮盐（常用坚牢蓝BB）偶联，形成不溶性有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。单核细胞的阳性可被氟化钠抑制，需同时做氟化钠抑制试验。
2.结果判断★★
①无颗粒沉淀为“-”。
②颗粒少量、稀疏为“±”。
③胞质内1/2区域出现颗粒沉淀为“+”。
④胞质内3/4区域出现颗粒沉淀“++”。
⑤胞质内布满颗粒沉淀“+++”。
⑥胞质内充满浓密的颗粒沉淀“++++”。
3.正常血细胞的染色反应★★
（1）粒细胞系统 原粒细胞为阴性或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
（2）单核细胞系统 原始单核细胞为阴性或阳性反应，幼单核细胞和单核细胞均为阳性反应，此反应能被氟化钠抑制。
（3）淋巴细胞 淋巴细胞呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
（4）红细胞系统 早期幼红细胞可呈阳性反应，随细胞的成熟阳性反应程度逐渐减弱，此反应不被氟化钠抑制。
（5）巨核细胞和血小板 为阳性反应。
4.临床意义★★★
①急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞呈阳性反应，此反应不被氯化钠抑制。
②急性单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，此反应被氯化钠抑制。
③急性粒单核细胞白血病时，部分白血病细胞的阳性反应可被氟化钠抑制，部分不被氯化钠抑制。
七、碱性α-丁酸萘酚酯酶染色
1.原理★★
在碱性条件下，血细胞内的α-丁酸萘酚酯酶水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放α-萘酚与基质液中的重氮盐偶联呈不溶性的有色沉淀。
2.结果判断★★
胞质中出现有色颗粒为阳性结果。
3.正常血细胞的染色反应★★
①粒细胞系统中各期细胞呈阴性反应。
②原始单核细胞呈阴性或阳性反应，幼稚和成熟单核细胞呈阳性，此反应能被氟化钠所抑制。
③T淋巴细胞呈阳性，B淋巴细胞呈阴性。
④巨核细胞、幼红细胞、浆细胞呈阴性或弱阳性，组织细胞也可呈阳性反应，但不被氟化钠抑制。
4.临床意义★★★
①急性单核细胞白血病时，单核系细胞呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制。
②急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病时，白血病细胞呈阴性反应。
③急性粒单细胞白血病时，部分白血病细胞呈阳性反应，部分呈阴性反应。
八、酸性磷酸酶染色
1.原理★★
血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS-BI水解，释放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI与六偶氮付品红偶联，形成不溶性红色沉淀。
2.结果判断★★
①胞质无色为“-”。
②胞质出现淡红色颗粒“+”。
③胞质布满鲜红色颗粒“++”。
④胞质充满深红色颗粒“+++”。
3.正常血细胞的染色反应★★
粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。
4.临床意义★★★
①鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者酸性磷酸酶染色为阳性反应，后者为阴性反应。
②多毛细胞白血病时多毛细胞、淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞的酸性磷酸酶染色都为阳性，前者耐L-酒石酸的抑制作用，后两者可被L-酒石酸抑制。
③T淋巴细胞呈阳性反应，而B淋巴细胞为阴性反应。
九、铁染色
1.原理★★
细胞外含铁血黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。
2.结果判断★★
（1）细胞外铁 存在于骨髓小粒中，铁染色可呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状，根据其存在方式及数量分为“-”“+”“++”“+++”“++++”。
（2）细胞内铁 观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞，计算出铁粒幼红细胞的百分比。铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞，分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环形铁粒幼红细胞。环形铁粒幼红细胞是指幼红细胞胞质内蓝色颗粒在6颗以上，围绕核周1/2以上者。成熟红细胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。
3.正常血细胞的染色反应★★
细胞外铁为“+”～“++”，铁粒幼红细胞阳性率19%～44%，以Ⅰ型多见。
4.临床意义★★★
（1）缺铁性贫血 细胞外铁明显减低甚至为阴性，细胞内铁阳性率减低或为零。
（2）铁粒幼细胞贫血 细胞外铁明显增多，细胞内铁阳性率增多，出现较多环形铁粒幼细胞。
（3）骨髓增生异常综合征 细胞外铁明显增多，环形铁粒幼细胞>15%。
（4）感染、肝硬化、慢性肾炎及尿毒症、血色病及多次输血后，骨髓细胞外铁增加；非缺铁性贫血，细胞外铁和内铁正常或增加。
考题回顾与同步练习
【例1】正常血细胞的过氧化物酶染色阳性最强的是
A.嗜碱粒细胞 B.嗜酸粒细胞 C.单核细胞 D.淋巴细胞 E .浆细胞
【例2】成熟中性粒细胞过氧化物酶活性增高见于
A.再生障碍性贫血 B .巨幼细胞贫血 C.慢性粒细胞白血病 D.急性粒细胞白血病 E .骨髓增生异常综合征
【例3】中性粒细胞碱性磷酸酶积分值降低的疾病
A.骨髓纤维化 B .蜂窝织炎 C.急性粒细胞白血病 D.慢性淋巴细胞白血病 E .慢性粒细胞白血病急变期
【例4】α-醋酸萘酚酯酶染色呈阳性且能被氟化钠抑制的细胞是
A.单核细胞 B .早幼粒细胞 C .中幼粒细胞 D.淋巴细胞 E .巨核细胞
【例5】为了区别红白血病与巨幼细胞贫血，下列首选的化学染色是
A.POX染色 B.PAS染色 C.NAP染色 D.铁染色 E.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
【例6】酸性磷酸酶染色呈阴性的细胞是
A.多毛细胞 B.尼曼-匹克细胞 C.T淋巴细胞 D.转移癌细胞 E.淋巴肉瘤细胞
【例7】下列哪种疾病中的幼红细胞或特殊病理细胞糖原染色呈强阳性反应
A.巨幼细胞贫血 B.尼曼-匹克病 C. 红白血病 D.再生障碍性贫血 E.霍奇金病
【例8】最适宜用来鉴别急性粒细胞白血病与急性单核细胞白血病的细胞化学染色是
A.POX染色 B.NAP染色 C. 苏丹黑B染色 D.PAS染色 E.α-NAE+NaF抑制试验
【例9】急性红白血病下列哪项是错误的
A.外周血可见幼红细胞和幼粒细胞 B.幼红细胞POX阳性 C.幼红细胞有巨幼样变 D.幼红细胞糖原染色阳性明显增高 E.骨髓红系明显增生
【例10】不符合急性单核细胞性白血病细胞化学染色结果的是
A.α-NAE阳性，不被NaF抑制 B.AS-D-NCE阴性 C.AS-D-NAL阳性，被NaF抑制 D.α-NBE阳性，被NaF抑制 E.POX弱阳性或阳性
【例11】关于细胞外铁，下列哪项是错误的
A.反映骨髓储存铁量 B . 以 普 鲁士蓝反应显示其存在 C.正常人为阴性反应 D . 它 是 铁蛋白的聚合体 E.缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁明显降低至消失
【例12】多毛细胞白血病
A.酸性磷酸染色强阳性 B . 糖 原 染色积分值增高 C.非特异性酯酶染色强阳性，阳性可被氟化钠抑制 D.骨髓铁染色细胞内外铁增加，有环形铁粒幼细胞 E.过氧化物酶染色阳性
【例13】与急性单核细胞白血病相符合的细胞化学染色
A.酸性磷酸染色强阳性 B . 糖 原 染色积分值增高 C.非特异性酯酶染色强阳性，阳性可被氟化钠抑制 D.骨髓铁染色细胞内外铁增加，有环形铁粒幼细胞 E.过氧化物酶染色阳性
【例14】中性粒细胞碱性磷酸酶活性增高主要见于
A.多发性骨髓瘤 B.阵发性睡眠性血红 蛋 白 尿症 C .细菌性感染 D.急性粒细胞白血病 E.慢性粒细胞白血病
参考答案
1.B 2.A 3.C 4.A 5.B 6.B 7.C 8.E 9.B 10.A 11.C 12.A 13.C 14.C