4.1 桑黄多糖的提取纯化

实验流程如图4.1，具体步骤如下：

将大块桑黄除去木质部，烘干，粉碎成粉末称取100g，用滤纸分包（每包约15g）备用。将包好的桑黄粉末分批装入索氏提取器，用乙酸乙酯脱脂8h，再将脱脂后的小包药品用丙酮回流8h除去残余的乙酸乙酯，脱脂完成后烘干。将脱脂后烘干的桑黄粉末浸泡于1500mL生理盐水中3h左右，离心，弃上清，两次；在用清水清洗两次，弃上清。将清洗过的子实体粉末中加入2000mL纯水，在120℃灭菌锅中提取4h，离心，留上清，残渣用于碱提。配置0.05%硼氢化钠与5%氢氧化钠混合液2000mL，将水提后的滤渣每次用2000mL碱液提取4h，提取两次，合并上清。将碱提取液用冰醋酸调节pH至7离心，收集上清液。用氨水调节pH至8～9，每隔30min加入30%双氧水20mL搅拌脱色处理，直至溶液近无色。最后采用Sevage法除蛋白，加入氯仿和正丁醇（提取液体积∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1）搅拌0.5h，收集上层提取液，除蛋白3次。收集上清液透析后冷冻干燥获得碱提多糖样品，标记为PV－B。热水浸提多糖同样经脱色，除蛋白处理后透析，最后冷冻干燥到到热水提多糖，标记为PV－W。

图4.1

实验获得热水浸提法的多糖产率为0.96%；碱提法获得多糖的产率为4.65%；碱提法产率明显高于热水浸提法。因为碱液能溶解和破坏真菌子实体细胞壁和细胞膜，促进细胞壁中和细胞内多糖的溶出，另外，碱液能破坏多糖之间的氢键，促进多糖溶解。因此，碱提法的产率较高。多糖中蛋白质含量通过凯式定氮法检测，得到PV－W和PV－B中蛋白含量分别为3.2%和1.3%，含量较低，在后续化学结构分析中忽略不计。