第二节 丝胶蛋白吸附工艺
一、实验部分
（1）实验仪器。烧杯、玻璃棒、分光光度计、移液管、恒温水浴锅、烘箱、电子天平、秒表、温度计、pH试纸、表面皿、镊子等。
（2）实验试剂。蒸馏水、冰块、离子液体铁配合物、氢氧化钠、盐酸、七水硫酸亚铁、丝胶蛋白。
二、吸附实验操作
首先配制好不同浓度的丝胶蛋白溶液，搅拌均匀后，加入不同质量的离子液体铁配合物使其充分反应，最后通过观察反应后丝胶蛋白的吸光度值来测定丝胶蛋白的吸附率。本实验主要考查不同浓度、不同固体质量、不同反应时间、不同反应温度、不同pH条件对离子液体铁配合物吸附丝胶蛋白的影响。
1.丝胶蛋白标准曲线
配制5个不同浓度的丝胶蛋白溶液（浓度分别为1mg/mL、0.75mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL）。
（1）用电子天平准确称取0.1g丝胶蛋白于烧杯中，加入100mL蒸馏水，并用玻璃棒搅拌使其全部溶解，配成浓度为1mg/mL的溶液。
（2）用移液管分别取1.5mL蒸馏水和0.5mL丝胶蛋白溶液配成浓度为0.75mg/mL的溶液。
（3）用移液管分别取1mL蒸馏水和1mL丝胶蛋白溶液配成浓度为0.5mg/mL的溶液。
（4）取0.5mg/mL的溶液1mL，再加入1mL的蒸馏水将其稀释1倍，此时浓度为0.25mg/mL。
（5）取0.25mg/mL的溶液1mL，再加入1mL的蒸馏水将其稀释1倍，此时浓度为0.125mg/mL。
最后测出不同浓度下丝胶蛋白溶液的吸光度值。将仪器参数先设置好，首先测量一下基线，然后分别测5个浓度溶液的吸光度，做出丝胶蛋白标准曲线。
2.吸附丝胶蛋白的离子液体金属配合物用量工艺条件
先取5份3mL浓度为0.25%的丝胶蛋白溶液于5个小管内，然后用电子天平准确称量固体（离子液体金属配合物），分别称取的固体质量为0.02g、0.04g、0.06g、0.08g、0.1g；再将上述称量好的固体依次加入装有丝胶蛋白溶液的小管内，做好标记，放入离心泵中离心3min，用移液管分别从上述5个管内取出2mL加入到离心管，备用；调节好基线后，分别测出上述5个不同溶液的光谱，观察其吸光度值的变化。
3.吸附丝胶蛋白的吸附时间工艺条件
取5份3mL浓度为0.25mg/mL的丝胶蛋白溶液于5个小管内，用电子天平准确称量离子液体铁配合物0.08g，依次加入上述5个管内；然后将第一个小管均匀摇晃5s后离心2min，用移液管取其上层清液2mL，并测量其吸光度A1，做好标记1；将测完吸光度的溶液倒回管内，继续均匀摇晃25s（即固体与丝胶蛋白溶液的接触时间为30s）后离心2min，用移液管取其上层清液2mL，并测量其吸光度A2，做好标记2；接着将上一步骤中测完吸光度的溶液倒回管内，继续均匀摇晃30s（即固体与丝胶蛋白溶液的接触时间为60s）后离心2min，用移液管取其上层清液2mL，并测量其吸光度A3，做好标记3；继续将测完吸光度的溶液倒回管内，继续均匀摇晃30s（即固体与丝胶蛋白溶液的接触时间为90s）后离心2min，用移液管取其上层清液2mL，并测量其吸光度A4，做好标记4；最后将测完吸光度的溶液倒回管内，继续均匀摇晃210s（即固体与丝胶蛋白溶液的接触时间为300s）后离心2min，用移液管取其上层清液2mL，并测量其吸光度A5，做好标记5。
4.吸附丝胶蛋白的温度工艺条件
首先配置好浓度为0.25mg/mL的丝胶蛋白溶液，用移液管取3mL于小管内，再用电子天平准确称量离子液体铁配合物质量0.08g于管内。将冰块和水混合在大烧杯内，控制温度为0℃，将小管放进去，均匀摇晃300s，再放入离心泵中离心3min，取其上层清液，并测量其吸光度A1；测量后再倒回管内，把上述中的小管放入水浴锅中加热到10℃，摇晃300s并离心3min，取其上层清液并测量其吸光度A2；再将水浴锅加热到20℃，将小管放进去，摇晃300s再离心3min，测其吸光度A3；继续将水浴锅加热至40℃，重复上述步骤，测其吸光度为A4；接着把水浴锅加热到60℃，并重复上述的步骤，测其吸光度为A5；观察5个温度条件下吸光度的变化，并绘制曲线。
5.吸附丝胶蛋白的pH工艺条件
取浓度为0.25mg/mL的丝胶蛋白溶液3mL于小管内，稀释盐酸后取0.5mL加入到蛋白溶液中，用pH试纸测其pH至2，此时管内溶液体积为3.5mL，环境为酸性，测量其吸光度值A1；再取浓度为0.25mg/mL的丝胶蛋白溶液3mL于小管内，加入0.5mL的蒸馏水，此时管内溶液体积为3.5mL，环境为中性，测量其吸光度值A2；接着取浓度为0.25mg/mL的丝胶蛋白溶液3mL于小管内，稀释NaOH后取0.5mL加入到蛋白溶液中，并用pH试纸测其pH至10，此时管内体积为3.5mL，环境为碱性，测量其吸光度值A3；最后将上述3个小管分别加入等量的固体0.08g，放入装有60℃水的烧杯中，均匀摇晃300s，并放入离心泵中离心2min，测量此时3个溶液的吸光度值，并计算其在3个环境下的吸附率。
6.丝胶蛋白的解吸工艺条件
取浓度为0.5mg/mL的丝胶蛋白溶液于小管内，测其吸收光谱；加入0.08g固体，再加入0.5mL的蒸馏水，使其pH呈中性，在60℃的环境下振荡300s，然后放入离心泵中离心2min后，取其上层清液并测量其吸收光谱；再将管内上层清液用移液管吸走，留固体于管内，此时向其加入0.1mol/L NaOH水溶液3mL进行解吸，再离心2min，取上层清液测量其吸收光谱。