第一篇　医学免疫学检测技术

第一章　抗原抗体反应及免疫分子检测技术

第一节　凝集反应

一、直接凝集反应

在适当电解质参与下，细菌、红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应（direct agglutination reactions），包括玻片凝集试验和试管凝集试验两种。

（一）玻片凝集试验

1.原理

以已知抗体作为诊断血清，与菌液或红细胞悬液等待检颗粒抗原在玻片上进行直接反应。

2.应用

玻片凝集试验为定性试验方法，方法特异、简便、快速，主要用于人类ABO血型鉴定，菌种鉴定和血清学分型。

（二）试管凝集试验

1.原理

将待检血清在试管中进行系列稀释，加入已知颗粒抗原温育后，观察每个试管内的凝集现象，通常以产生明显凝集现象的最高血清稀释度为该血清的抗体效价。

2.应用

试管凝集试验为半定量试验方法，主要用已知抗原测定待检者血清中有无某种特异性抗体及其效价，以辅助诊断疾病或进行流行病学调查。例如：诊断伤寒和副伤寒的肥达试验、诊断布鲁菌病的瑞特试验、诊断立克次体病的外斐反应等。

二、间接凝集反应

间接凝集反应（indirect agglutination reactions）是将可溶性抗原（或抗体）吸附于与免疫无关的颗粒表面，在适宜电解质存在的条件下与相应抗体（或抗原）作用，出现特异性凝集现象。与免疫无关的颗粒称为载体，常用载体包括红细胞、聚苯乙烯胶乳颗粒、活性炭粉、明胶颗粒、细菌等。

（一）胶乳凝集试验

1.原理

胶乳凝集试验（latex agglutination test，LAT）的原理是使用抗原（或抗体）致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，直接与待测标本中的抗体（或抗原）作用，出现肉眼可见的白色凝集物。

2.应用

具有简便、快速、特异等特点，是某些疾病诊断较为理想的初筛试验，可用于检测抗链球菌溶血素O抗体（ASO）、类风湿因子（RF）等。

（二）明胶凝集试验

1.原理

明胶凝集试验（gelatin agglutination test，GAT）的原理是使用粉红色明胶颗粒吸附抗原，再与待检血清作用，出现肉眼可见的粉红色凝集现象。

2.应用

由于其灵敏度高、简便、快速，常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。

（三）协同凝集试验

1.原理

葡萄球菌蛋白A（SPA）具有与IgG Fc段结合的特性，当葡萄球菌与IgG抗体连接时，暴露的Fab段可与相应抗原结合，出现特异凝集（coagglutination）现象。

2.应用

特异、灵敏、简便、快速，应用范围广，可用于肺炎球菌、乙型溶血性链球菌、脑膜炎奈瑟菌以及腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、白喉病毒等的快速鉴定，还可检测脑脊液、血液和尿液中的病原菌，也可用于免疫复合物中特异性抗原的鉴定和淋巴细胞亚群的鉴定。

三、抗球蛋白试验

抗球蛋白试验是抗球蛋白参与的间接血凝试验，由Coombs建立，故又称Coombs试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。不完全抗体多数为7S的IgG类抗体，虽能与相应抗原结合，但因其分子量小、体积小，不能发挥桥联作用，在一般条件下不能出现肉眼可见反应。Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体发挥桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使出现肉眼可见凝集现象。

（一）直接抗球蛋白试验

1.原理

将抗球蛋白抗体直接加入患者待检红细胞悬液中，若红细胞已结合不完全抗体，即可出现红细胞凝集现象。

2.应用

常用于检测新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血、医源性溶血等患者红细胞上的不完全抗体。

（二）间接抗球蛋白试验

1.原理

将携带不完全抗体相应抗原的红细胞加入待检血清中予以反应，再加入抗球蛋白抗体，若待检血清中含有红细胞不完全抗体，即可出现肉眼可见的红细胞凝集现象。

2.应用

用于检测血清中游离的红细胞不完全抗体，多用于母体Rh（D）抗体和因红细胞不相容输血所产生的血型抗体检测。