miRNA在体液中能够稳定存在为未来miRNA作为疾病诊断的标记物提供了可能。但是受限于技术的发展以及多种干扰因素的存在，将体液中miRNA发展为临床可以应用的生物标记物任重道远。

1.应用于临床的体液miRNA检测技术仍不成熟。从血浆或血清中分离miRNA仍有一定的挑战性，一方面是因为miRNA丰度低，另一方面是因为血液中的污染物会抑制PCR。商品化的试剂盒能简化和加速miRNA提取过程，已成为循环miRNA研究不可缺少的工具。然而很少有人横向评估这些试剂盒的提取效率如何，是否能去除血浆中的污染物，是否会偏向特定的miRNA。而这类评估对于结果解释和实验之间的比较都很关键。

2.与传统蛋白质指标比较并未显示明显的优势。目前检测miRNA的主要方法是PCR法。PCR法具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，而目前临床上检测蛋白水平变化多采用ELISA试剂盒，也具操作简单、快速、敏感性高、特异性强、实验设备要求简单、应用范围广泛、无放射性污染，有能定性及半微量、微量、超微量定量分析的特征。

3.由于血液中miRNA的水平会随着疾病的进程发生改变，呈现一个动态变化的过程，并且这不仅仅是时间上的动态过程，还包括空间上的以及各种细胞环境因素的影响。因此我们不应该将其作为一个静态指标来对待。检查必须注重时间点、取材部位和患者可能带有的其他疾病的干扰。这种动态有其优点，那就是为疾病分期、分亚型等提供了可能的帮助，有利于选择最佳的治疗方案。但也给临床如何选择标准化的时间和部位进行检测提供了难度。

4.由于miRNA的多靶点调控的特征，一种miRNA可能参与多种疾病的过程，并在血液中得以体现。这就使得miRNAs作为疾病诊断的生物标记物的特异性受到了挑战。在已经发现的上千种miRNAs中寻找某一疾病特异miRNA仍然是目前各研究领域需要解决的关键问题。

尽管把细胞外miRNAs作为生物标记物仍然有很多问题需要解决，但我们相信，随着科学技术的不断进步和科学家们的不懈努力，这些都将会成为过去。