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第三节 实验检测
一、实验材料
（一）仪器设备
1.光学显微镜：目镜10×；物镜10×、40×、100×。
2.载玻片：1×3英寸长，1mm厚度，一端磨砂。
3.钝刀：皮肤真菌取材无菌钝刀。
4.酒精灯。
（二）试剂
1.染液
罗吉固定液、鞣酸媒染剂、Fontana银溶液。
Fontana镀银染色配制：
（1）固定液：
冰醋酸（分析纯）1ml，甲醛（分析纯）2ml，加蒸馏水至100ml。
（2）媒染液：
鞣酸（分析纯）5g，苯酚（分析纯）1ml，加蒸馏水100ml。
（3）硝酸银溶液：
硝酸银（分析纯）5g，加蒸馏水100ml。
（4）银铵染液配制：
用前取硝酸银溶液20ml，逐滴加入100g/L氢氧化铵，至产生棕色沉淀，轻摇后溶解，微呈乳白色。
也可用以下镀银染色配方：
（1）固定液：冰醋酸（分析纯）1.5ml，甲醛（分析纯）2.75ml，加蒸馏水至100mL。
（2）媒染液：鞣酸（分析纯）5g，苯酚（分析纯）1ml，加蒸馏水至100ml。
（3）硝酸银溶液：硝酸银（分析纯）1g，加蒸馏水100ml。
（4）银铵染液配制：
用前取硝酸银溶液20ml，逐滴加入100g/L氢氧化铵，至产生棕色沉淀，轻摇后溶解，至咖啡色混浊恰好变清。
2.阳性对照片
已知的梅毒硬下疳制备的阳性涂片，或经兔睾丸感染培养后的组织印片，或商品化梅毒螺旋体悬液制备的涂片。
3.阴性对照片
用大肠埃希菌涂片作阴性对照片。
4.其他试剂
无水酒精，香柏油
二、检测步骤
1.将上述标本制备好涂片，于空气中自然干燥。
2.用罗吉固定液将涂片固定2～3分钟；用无水乙醇（酒精）冲洗。
3.加媒染剂于涂片上，微加热产生蒸汽，染色30秒，水洗。
4.加银染液于涂片上，微加热产生蒸汽，染色30秒，水洗后待干。
5.加盖玻片以加拿大树胶封固，用油镜检查。封固的目的是防止镜油使标本脱色，同时有利于标本长期保存。
三、结果报告
用普通光学显微镜40×物镜扫描涂片均匀的区域，转换100×油镜辨认见到菌体淡黄褐色至棕褐色，小而纤细，两端尖细，有6～12个规则螺旋，层次清晰，弯曲且缠绕紧密的螺旋体（图6-1，图6-2），报告镀银染色法找到螺旋体；如未发现螺旋体，则报告镀银染色法未见螺旋体。
图6-1 梅毒螺旋体镀银染色（40×）
图6-2 梅毒螺旋体镀银染色（100×）
（引自：章楚光，胡伟忠，顾伟鸣．镀银染色法在一期梅毒实验室诊断中的应用．中国皮肤性病学杂志，2004，18（12）：756）
四、结果解释
镀银染色找到典型的螺旋体，结合病史，临床表现，可用于梅毒诊断。对于口腔溃疡的标本应注意与其他螺旋体相区别。有典型临床症状（硬下疳）而镀银染色为阴性时，应重复取材检查，以提高阳性检出率。如果未观察到梅毒螺旋体，不能完全排除梅毒感染的可能性，应嘱咐患者复查，在这种情况下，建议连续检查三天。
五、注意事项
1.银氨液质量要好，每次测定前需要新鲜配制，否则影响染色效果。
2.取材时应取足够量的组织渗出液，溃疡部位取材前，应用无菌生理盐水清洁溃疡皮损表面，有结痂时应将痂皮揭开，用钝刀刮取组织液。可制备多张涂片，以提高阳性率或留作阳性质控对照。
3.取材的钝刀要消毒，取材时避免出血。
4.染色用酒精灯加热染液时，微加热产生蒸汽即可，防止染液烤干。