硬下疳、宫颈或阴道皮肤黏膜皮损的组织液、淋巴结抽取液及羊水等样本适合于暗视野显微镜检测。理想的样本是含有较多组织液，干扰细胞少。为了增加检测的敏感性，应考虑采集每一个可疑皮损的组织液样本。口腔或直肠部位的皮损样本不适合于暗视野显微镜检查梅毒螺旋体，因为有其他非梅毒螺旋体的存在而干扰检测的结果。如患者采用了皮损局部抗生素治疗，则梅毒螺旋体失去活力而不宜检测，可抽取淋巴结液进行检测。

用无菌盐水湿润的棉拭子轻轻擦去皮损上的污物。如皮损上有痂皮，可用钝刀小心除去。用拇指和示指挤压皮损部位周边，使基底部组织液渗出，再用灭菌的钝刀或盖玻片轻轻地刮取组织渗出液（图5-1），尽量避免出血，将钝刀上组织渗出液均匀地涂布于载玻片上，轻轻覆盖盖玻片；如用盖玻片取材直接将盖玻片上组织渗液向下压在载玻片上，立即置暗视野显微镜下检查，避免干燥。如刮取的组织渗液较少，可加少量生理盐水混匀后加盖玻片。

用阴道窥器扩开阴道，观察皮损，用棉拭子擦去宫颈或阴道分泌物，按照上法，用无菌的刮勺采取皮损组织液制备样本片。

用针头轻轻挑去皮疹的表皮，尽量避免出血，挤压皮疹周边使组织液渗出，用无菌盖玻片的边角或无菌钝刀刮取组织液，按照上述方法制备玻片。

75%乙醇消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦拭干净。用1ml无菌注射器配12号针头，吸取无菌等渗盐水0.25～0.5ml，以无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水，再吸入注射器内，反复2～3次后，取少量淋巴液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野显微镜下检查。

样本采集后5～20分钟内必须检查完毕，否则会随着时间的延长而使螺旋体运动力减弱或完全失去运动力影响结果观察。