血常规可正常，也可表现为贫血、白细胞下降、血小板下降等，贫血常见于疾病晚期或合并溶血性贫血时；HL偶可表现为嗜酸性粒细胞增多；约1/3HL患者淋巴细胞绝对值减少；少数患者，特别是外周T细胞淋巴瘤等会发生全血细胞减少。

1.红细胞沉降率增快提示病情活动。

2.血清乳酸脱氢酶、C反应蛋白、β ₂微球蛋白水平升高反映瘤细胞增殖速度快，如乳酸脱氢酶>500U/L提示NHL预后不良。

3.血清铜、铁蛋白水平在病情进展时升高、缓解期则下降。

4.碱性磷酸酶升高常提示有肝或骨骼受累。

5.高钙血症常提示有骨侵犯，此种变化可出现于X线改变之前。

HL患者对结核菌素等反应性降低，体外淋巴细胞转化率减低，程度与疾病的进展有关，体液免疫一般正常。部分NHL患者可有体液免疫异常，表现为自身免疫性溶血性贫血、免疫性血小板减少等，库姆斯（Coombs）试验阳性，少数患者有单克隆高免疫球蛋白血症。缓解期患者免疫功能可恢复正常。

部分淋巴瘤与感染相关，如 H.pylori感染与MALT淋巴瘤相关，EB病毒和伯基特淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤相关等，故应根据患者的淋巴瘤类型对患者进行相关感染方面的筛查，如 H.pylori、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、EB病毒（EBV）和人免疫缺陷病毒（HIV）等。

淋巴瘤的诊断是病理学中的最大难题之一，对于一些疑难病例需要进行分子遗传学检测。随着高通量测序技术的发展及其在临床中的应用，越来越多的淋巴瘤相关基因学异常被发现并用于临床及临床前检测，对淋巴瘤的诊断、预后判断、疗效分析及用药指导具有重要的提示作用。

1.染色体G显带核型分析　利用细胞遗传学方法可以发现染色体数量或结构异常，具有3个及以上染色体异常的复杂核型者预后较差，淋巴瘤各亚型常见的染色体异常见表1-2。

2.荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）检测 通常是直接在石蜡包埋组织切片上进行间期FISH，由于不需要新鲜组织进行中期分裂象培养，操作方便、可以快速检测基因重排、扩增及易位，对于淋巴瘤的诊断、鉴别诊断以及预后判断有着重要意义。目前淋巴瘤主要FISH探针有 IgH/CCND1、c-MYC、IgH/Bcl-2、Bcl-6、MALT1等。对于DLBCL患者尤其应进行FISH检测，2016WHO诊断中专门将 MYC，Bcl-2和（或） Bcl-6基因重排阳性，即所谓“双重打击”或“三重打击”的高侵袭性B细胞淋巴瘤作为一个新的分类；而利用免疫组化检测MYC和Bcl-2蛋白表达阳性，即“双重表达”，仅作为一项预后不良指标。因为引起蛋白表达原因较多，所以MYC蛋白表达阳性者未必同时具有MYC基因重排，由于“双重打击”较“双重表达”预后更差，所以对于DLBCL患者可先行免疫组化检测，发现“双重表达”者有必要进一步FISH明确是否为“双重打击”。

3.微阵列比较基因组杂交（microarray comparative genomic hybridization，aCGH）是在FISH基础上结合基因芯片技术发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术，一次杂交即可在整条染色体或染色体区带水平对不同基因组间DNA序列拷贝数的差异进行检测并定位。该技术具有高通量、分辨率高的特点，可以发现染色体微结构异常，如微缺失、微重复、拷贝数变异等，缺点是不能发现染色体平衡易位。

IgH和 TCR基因重排分析对淋巴造血性疾病的良恶判定高度敏感并且特异，尤其是对于结合常规组织学与免疫组化仍难以确诊的病例，需要进行PCR检测协助诊断。常检测的基因包括： IgH重排、 Igκ基因重排、 TCRγ基因重排、 TCRβ基因重排、 TCRδ基因重排。基因重排分析可以用毛细管电泳的方法检测。

随着高通量测序的发展及其在临床的应用，越来越多的疾病疾病表达谱被应用于临床进行患者诊断、疗效判断、药物选择及预后评价。淋巴瘤各亚型常见的基因突变及表达异常详见各疾病章节及表1-3。主要检测方法为第一代测序和第二代测序技术。在过去的十年里，第一代测序技术被应用到临床肿瘤的分子诊断中，但因其成本高、速度慢、通量低等特点越来越无法满足临床需要。第二代测序技术，也叫下一代测序（next generation sequencing），是迄今为止发展最为成熟、使用最为广泛的DNA 高通量测序手段。第二代测序技术使全基因组、全外显子和表观遗传学组测序成为可能，同时也可以预测单个基因的扩增， MYD88基因突变、RHOA、Notch途径的基因突变就是通过大规模第二代测序总结出来的，其缺陷是序列长度较短，但可以通过生物信息学工具在一定程度上进行弥补，因此第二代测序技术是现今最稳定、应用范围最广泛的测序技术。第三代测序，是最近发展起来的新型测序技术，不需要建立文库，可以检测长达几kb的序列，对融合基因检测、HLA分型等优势明显，但是第三代测序在准确率方面有严重缺陷，目前正在通过减缓DNA序列通过纳米孔速度的方式提高第三代测序的准确度，预计未来10年内第三代测序的准确度将会显著提升，将来可能会在保证测序通量的基础上，凭借超长序列读长的优势取代二代测序。各测序技术平台的特点见表1-4。近年发展起来的数字PCR技术（digital PCR，dPCR）是一种突破性的定量分析技术，较qPCR技术具有高灵敏度、高精确度、高耐受性和绝对定量等优势，已被学者尝试应用在淋巴瘤诊断中，用于检测低含量的稀有突变基因。目前商业化的dPCR技术包括微滴式dPCR（droplet DPCR，ddPCR）和芯片式 dPCR（chip dPCR，cdPCR）。

1.霍奇金淋巴瘤通常发生于淋巴结，肉眼可见淋巴结体积增大，切面灰红、质软、鱼肉样。组织学上，淋巴结结构被肿瘤组织部分或全部破坏，肿瘤为少数散在体积较大的单核、双核或多叶核的肿瘤细胞，核大，可见红色的大核仁，形成所谓的诊断型R-S细胞，周围大量非肿瘤性的反应性细胞为背景，如B淋巴细胞、T淋巴细胞、组织细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。

2.非霍奇金淋巴瘤可原发于淋巴结或结外淋巴组织，淋巴结或结外组织正常结构破坏，肉眼上，肿瘤组织与霍奇金淋巴瘤类似；组织学上，肿瘤细胞形态单一，可形成结节样结构或弥漫性增生浸润。B细胞肿瘤时，瘤细胞成片，单一性，可以是一致的小细胞，也可以是体积较大的细胞，背景成分少。但T细胞淋巴瘤反应性增生的细胞成分更加复杂，常有内皮肥胖的小血管增生，伴有嗜酸性粒细胞浸润，影响肿瘤细胞的辨认和分析。肿瘤细胞形态多样性，从小的扭曲核到大的有核仁的母细胞，胞质常淡染或透明。

1.淋巴瘤的免疫分型

（1）B细胞抗体

1）CD19是B淋巴细胞分化过程中最早出现的免疫标志，正常浆细胞和少数恶性浆细胞也有CD19的表达。部分急性髓系白血病（AML）表达CD19常与t（ 8；21）相关。目前主要用于流式细胞仪的检测。

2）CD20在前B细胞成熟晚期出现，CD20出现在免疫球蛋白（Ig）轻链基因重排和表面Ig表达之间的B细胞表面，在CD19和CD10表达之后，并一直持续存在，直至浆细胞阶段消失，50%以上B淋巴母细胞性淋巴瘤/白血病强阳性，几乎所有成熟B细胞来源的淋巴瘤（浆细胞性疾病除外）及25%以上霍奇金淋巴瘤R-S细胞阳性。

3）CD21表达主要见于滤泡树突细胞和部分B细胞，可以显示滤泡淋巴瘤时残存的树突细胞网，同时可显示血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤中增生的树突细胞岛。

4）CD23是一个能调节单核细胞因子释放的跨膜蛋白，慢性B淋巴细胞白血病/小B淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL）肿瘤细胞常特异性表达CD23，即便伴有大细胞转化的B-CLL/SLL，其也持续表达。故可用于和其他小B细胞类淋巴瘤的鉴别。

5）CD79a与免疫球蛋白分子相关，在B细胞发育过程中全程表达，几乎所有前B细胞淋巴瘤/白血病均表达，成熟B细胞淋巴瘤也同样阳性，因此是诊断B细胞淋巴瘤的特异性抗体。

6）PAX-5是B细胞标记物，存在于成熟的B淋巴细胞，是B细胞特异性抗体。表达在细胞核上。在组织处理不理想，表面抗原丢失时，检测此抗体可以获得较满意的信息。

（2）T 细胞抗体

1）CD1a在正常情况下的胸腺皮质细胞和朗格汉斯细胞表达该抗体，部分前T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病亦可有该抗体的表达。

2）CD2是一个T细胞标记物。绝大部分T细胞和自然杀伤细胞来源的肿瘤可表达该分子，部分正常的胸腺B细胞也可表达CD2。

3）CD3与T细胞受体形成复合物，参与信号转导，除部分间变性大细胞淋巴瘤和NK细胞源性的淋巴瘤/白血病外，多克隆抗体CD3ε是检测T细胞来源肿瘤的特异标记物。胞质CD3（cCD3）在初始T细胞（前胸腺细胞）上表达，胸腺细胞表达胞质和（或）胞膜CD3（mCD3）。前体T细胞肿瘤通常不表达mCD3，但cCD3为阳性。

4）CD4识别辅助-诱导T细胞。CD4在前T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病中无表达，侵袭性NK细胞白血病、结外NK细胞淋巴瘤、γδT细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、肠病型T细胞淋巴瘤等也很少阳性，但大部分成熟T细胞性淋巴瘤阳性。

5）CD5是大部分胸腺细胞和未成熟外周T细胞表面信号转导蛋白，肿瘤性T细胞发育过程中CD5易丢失，尤其是肝脾gdT细胞淋巴瘤和肠病型淋巴瘤。正常外周血和淋巴组织中存在CD5阳性的B细胞，儿童和年轻人多见。CD5主要表达于CLL/SLL和套细胞淋巴瘤。

6）CD7是泛T细胞抗原，没有T系特异性，是T细胞成熟时第一个出现的T系相关抗原，亦表达在CD3阴性的NK细胞中，还可表达在胎儿和小儿骨髓中一小部分髓系前体细胞、浆细胞样树突细胞、少量CD19阳性淋巴前体细胞。CD7在外周成熟T细胞增殖性疾病和T-ALL中通常表达异常、减弱或缺失，还可表达于原始NK细胞淋巴瘤/白血病和AML，CD7+AML提示预后不良，而APL和B细胞淋巴增殖性疾病中多不表达。

7）CD8表达于胸腺细胞、杀伤性/抑制性T细胞和某些NK细胞上。CD8单克隆抗体阻碍杀伤性T细胞活化，用于检测T细胞亚群。大部分大颗粒T细胞白血病（T-LGL）、肠型淋巴瘤以及少量外周T细胞增殖性疾病表达CD8。T-ALL表达CD8少见。

（3）其他鉴别诊断抗体

1）ALK 即 间变性淋巴瘤激酶，通过 t（ 2；5）染色体易位与NPM基因融合，在淋巴瘤中ALCL阳性。另外，部分DLBCL表达ALK，被命名为ALK+的大B细胞淋巴瘤。

2）Bcl-2用于滤泡淋巴瘤的诊断，约3/4滤泡淋巴瘤存在t（14；18）。正常情况下，Bcl-2主要表达于滤泡套区，生发中心内仅少数细胞阳性；而在滤泡淋巴瘤中，肿瘤性滤泡常弥漫阳性。

3）Ki-67抗体用于检测细胞增殖活性，与肿瘤分级和预后相关。

4）Cyclin D1 表达与 t（11；14）相关，套细胞淋巴瘤肿瘤细胞Cyclin D1阳性。

5）Bcl-6在生发中心B细胞阳性，套区阴性，表达于细胞核。

6）CD10是一个锌金属肽酶，正常生发中心细胞有表达，几乎前体B淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、伯基特淋巴瘤和大部分滤泡淋巴瘤肿瘤细胞CD10阳性。良性前体B细胞（hematogone）CD10表达为阳性。成熟粒细胞缺乏CD10的表达常与MDS相关。CD10在B-ALL和T-ALL中均没有独立的预后意义，而FL和DLBCL中，CD10阳性预后更好。

7）CD15是经典型霍奇金淋巴瘤的R-S细胞表面标记物之一，阳性信号位于细胞膜及核周Golgi体。

8）CD30阳性信号位于细胞膜和核周Golgi体。95%经典型霍奇金淋巴瘤部分H/RSC细胞阳性，淋巴瘤样丘疹病、ALCL和少数其他类型的淋巴瘤细胞也阳性。HL患者血浆CD30水平高提示预后不良。此外CD30阳性也见于胚胎细胞肿瘤和部分黑色素瘤。淋巴结中散在活化的淋巴细胞也呈阳性，以生发中心周边最为明显。因此CD30缺乏特异性，不可用作诊断的唯一指标。

9）CD45即白细胞共同抗原（CD45），能标记所有循环血和固定组织中的白细胞。

10）CD56是神经细胞黏附分子，为NK细胞标志，同时CD4和CD8阳性T细胞亚群也可有表达。NK细胞白血病、部分骨髓瘤、原始浆细胞样的树突状细胞肿瘤（BPDC）和 AML 常伴CD56表达。在伴有 t（8；21）的AML-M2、AML-M3和AML-M5中CD56阳性表达是预后不良的因素。骨髓增生异常综合征（MDS）和慢性骨髓增殖性肿瘤（MPN）的成熟粒细胞和单核细胞常表达CD56。

11）LMP-1是EB病毒潜在膜蛋白，是EB病毒感染的标志之一。

12）TIA-1是一种细胞毒性颗粒相关蛋白，NK细胞和细胞毒T细胞常有表达。

13）穿孔素和颗粒酶B是存在于NK细胞和细胞毒T细胞胞质内的细胞毒性颗粒相关蛋白，皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、侵袭性NK细胞白血病及结外NK/T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞常有表达。

14）TdT即末端脱氧核苷酰转移酶，是一种DNA聚合酶。正常情况只有原始B和T淋巴细胞表达TdT，它是检测急性淋巴细胞白血病/前淋巴母细胞淋巴瘤的一个敏感而特异的标记物，少数髓系白血病可以阳性。

2.常用鉴别诊断抗体参考如下（表1-5、表1-6）。

3.与淋巴组织非肿瘤性增生病变相鉴别

（1）Bcl-2蛋白可用于滤泡淋巴瘤与反应性滤泡增生的鉴别。

（2）CD68：组织细胞性坏死性淋巴结炎常表现为显著的组织细胞和T淋巴细胞增生，并常表现出轻度异型性，易与淋巴瘤混淆。免疫组化可显示坏死灶及周边尤其是在近淋巴结髓质侧呈片带状密集分布的CD68阳性细胞，提示增生的异型细胞主要是组织细胞，特别是在坏死改变不显著时，这对于坏死性淋巴结炎的诊断和除外淋巴瘤具有重要意义。

（3）κ或λ轻链如果形态学上表现为显著的B细胞增生，且免疫组化检测显示存在κ或λ轻链限制性表达，可提示B细胞为肿瘤性增生。

4.与其他肿瘤相鉴别　淋巴瘤需要与胚胎性横纹肌肉瘤、Ewing瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、神经内分泌肿瘤及淋巴结转移癌等鉴别。在鉴别淋巴瘤与其他组织来源的肿瘤时，必须做“套餐”式免疫组化标记检测，即同时进行淋巴细胞标记和被鉴别肿瘤的特异标记检测，互相印证，方可明确诊断（表1-7）。

CD（cluster of differentiation）专指白细胞膜上的抗原或抗原识别的抗体，又称为白细胞分化抗原。目前“CD”不仅代表白细胞表面抗原，还有红细胞、血小板和髓系细胞表面抗原以及其他组织细胞表面或细胞内的抗原，研究方法以流式细胞术检测为主。在流式细胞分析中，还有一些非CD类抗原分子常常结合CD分子进行检测，有助于疾病的发病机制研究及诊断、治疗等。除了上述免疫组化常用抗体，流式细胞术中应用的B细胞和T/NK细胞抗体如下：

与CD19同为泛B细胞的标志，表达于B细胞分化早期，在成熟期表达增强。多数TdT阳性前体B细胞呈胞质CD22阳性。多数B细胞淋巴瘤，尤其是毛细胞白血病（HCL）、脾边缘区淋巴瘤和幼淋细胞白血病（B-PLL）强表达CD22，而CLL中CD22表达较弱。

是一种高度糖基化的细胞表面糖蛋白，正常表达于B及前体细胞、活化T细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和一些上皮细胞，异常表达于大部分B-ALL（但存在11q23断裂点的除外）、大部分B系白血病/淋巴瘤和少数AML（尤其是M4和M5），毛细胞白血病弱表达。

表达于早期B和T细胞、生发中心B细胞、浆细胞、红系及髓系祖细胞上。成熟B细胞CD38表达减弱或缺失。浆细胞强表达CD38，多数AML和ALL表达CD38，强度较浆细胞弱。成熟肿瘤如CLL、FL、DLBCL和淋巴浆细胞样淋巴瘤（LPL）表达CD38。表达CD38的B-CLL预后不好。

表达于B细胞亚群和黏膜固有层T细胞，在HCL中强表达，也可见于肠型T细胞淋巴瘤和MZL。

表达于胸腺细胞、B细胞、活化T细胞上。CLL常表达CD200，而MCL往往为CD200阴性。

前 B细胞表达的第一个免疫球蛋白重链，表达于部分浆细胞和成熟B细胞。常用于判断B-ALL分期。

表达于成熟B细胞亚群，主要用于鉴别B-CLL和其他B细胞肿瘤，B-CLL不表达FMC7。

表达于正常B细胞，B细胞淋巴瘤常见胞膜免疫球蛋白轻链的限制性表达，MM常见胞质免疫球蛋白轻链的限制性表达。

表达于各阶段B细胞（大部分浆细胞除外）、造血祖细胞、髓系、红系和巨核系前体细胞、单核巨噬细胞、树突细胞、不成熟T细胞和活化T细胞上。多数B-ALL和AML表达HLA-DR，但APL、MM和T细胞白血病/淋巴瘤一般为HLA-DR阴性。

表达于T、NK和前B细胞上，主要用于CLL/SLL的免疫分型，CLL患者ZAP-70阳性提示预后不佳。

一种细胞活化抗原，表达于活化T细胞、B细胞以及单核/巨噬细胞中。在淋巴结中CD25可表达在小部分滤泡辅助T细胞上。大部分HCL、成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATCL）和少数其他T、B细胞增殖性疾病中表达CD25，变异型HCL不表达。

表达于NK细胞、T和B淋巴细胞。CD57在绝大多数B细胞淋巴瘤检测不到，偶可表达在“弥漫性母细胞B细胞淋巴瘤”，是t（14；18）滤泡淋巴瘤的组织学侵袭型。CD57表达在大多数T-LGL中，在慢性NK细胞增多症中多数表达，在大多数侵袭性NK细胞白血病、结外NK/T淋巴瘤（鼻型）中则是缺失的。

MHC Ⅰ类特　异性 N K 受体分子，表达CD94的细胞与表达MHCⅠ类分子的细胞结合时可导致细胞毒性受抑制，而与受到病毒感染缺乏MHCⅠ类分子表达的细胞结合则可维持细胞毒性。CD94正常表达于成熟NK细胞和细胞毒性T细胞，前NK细胞或幼稚NK细胞不表达，异常表达于鼻型NK/T淋巴瘤、侵袭性NK细胞白血病/淋巴瘤以及小部分结外细胞毒性T细胞淋巴瘤。

植物血凝素，正常表达于大部分NK细胞（成熟和未成熟、前NK）、小部分T细胞和胸腺细胞，异常表达于鼻型NK/T淋巴瘤、侵袭性NK细胞白血病/淋巴瘤，但在原始NK细胞白血病/淋巴瘤不表达。

在 T 细胞增殖性疾病中，TCR检测可将T细胞克隆性增殖与反应性增生区分开来。成人T-ALL约1/3表达TCR，表达TCRαβ的T-ALL约占2/3病例，剩余病例可表达TCRγδ。根据FAB分类，TCRαβ多表达在L1型中，而TCRγδ多表达在L2型中。大多数T细胞增殖性疾病都表达TCRαβ，所有皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤（SPTCL）都表达TCRαβ。在成熟T细胞肿瘤中，TCRγδ表达在小部分病例中，尤其是结节外型和黏膜型中。大多数肝脾T细胞淋巴瘤表达TCRγδ，主要与γβ1可变区相关。

T细胞受体的β链的变异区，用于鉴别T细胞克隆性，评价TCRvβ表达谱有助于恶性LGL诊断。

又称杀伤细胞抑制剂受体家族（killer cell inhibitory receptors family，KIR），表达于部分 NK 细胞亚群及T系亚群上，MHC Ⅰ类分子特异性（HLA-C特异性）NK受体，属于免疫球蛋白超家族。CD158分子通过与MHC Ⅰ类分子相互作用调节NK细胞介导的细胞溶解活性及细胞因子的产生。

流式细胞术在淋巴瘤的诊断、分型、分期以及微小残留病的监测中具有独立的重要作用。标本可取自骨髓、淋巴结、体液或受累及的实体组织。

良性淋巴结增生流式细胞术点图很相似，其特点为多克隆性以及免疫表型无错译表达。但流式细胞分析无异常并不能排除淋巴瘤，例如淋巴瘤细胞仅局部侵犯或标本处理时丢失抗原表达等。此外，霍奇金淋巴瘤的背景细胞抗原表达和反应性增生亦不易区分。在FSC/SSC或FSC/CD45散点图上，B和T细胞混杂显示为一群细胞，以抗B或抗T细胞抗体清晰分开。CD38和（或）HLA-DR阳性表达是淋巴细胞活化的表现。

见表1-8和表1-9。

由于大多数淋巴瘤缺乏特异性的肿瘤抗原，与正常淋巴细胞较难鉴别。流式细胞术检测M R D适用于具有较特异淋巴瘤相关抗原的淋巴瘤，如M C L和H C L，检测敏感度可达0.0 1%，与P C R结果具有可比性，但0.0 1%是灵敏度的极限，即使是多参数流式细胞仪（M F C）也难以超越。M F C（八色以上）能提供更精确的区分能力，从较少细胞标本中获取更多的信息，在低水平检测到异常细胞，从而快速地评估临床治疗反应，进行疾病危险程度分级，更好地指导临床工作。

淋巴瘤循环肿瘤细胞（CTC）是指存在于外周血中的淋巴瘤细胞，由于CTC在外周血中数量稀少，一般在10 ⁶~10 ⁷个白细胞中仅含有1个，如何找到CTC的特异性标志物并提高检测手段的敏感性和特异性是关注热点。流式细胞术能检测到具有较特异淋巴瘤相关抗原标志物的CTC，如四色MFC能检测出MCL患者外周血中8×10 ^-4的肿瘤细胞，而且超过85%的Ⅱ~Ⅳ期初诊MCL患者外周血中可检测到CTC。采用免疫磁珠分离富集技术和MFC相结合的方法可以提高CTC的检出率，有助于淋巴瘤早期转移的诊断、监测肿瘤复发与转移，评估化疗药物的敏感性以及判断预后。