第四节　色谱鉴别法

色谱鉴别法是利用不同组分在不同色谱操作条件下，具有各自的特征色谱行为如比移值R_f或保留时间等进行鉴别。同一种药物在同样条件下的色谱行为是相同的，依此可以鉴别药物及其制剂的真伪。常用方法如下。

一、 薄层色谱鉴别法

在实际工作中，一般采用对照品（或标准品）比较法，即将供试品和对照品（或标准品）用同种溶剂配成同样浓度的溶液，在同一薄层板上点样，展开、显色，供试品所显主斑点的颜色、位置应与对照品的主斑点相同。

薄层色谱法是一种简便易行的方法，其应用范围日益扩大。例如，《中国药典》（2015年版）规定头孢拉定的薄层色谱法鉴别试验为：“取本品和头孢拉定对照品各适量，分别加水制成每1ml中含6mg 的溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G 薄层板[经105℃活化后，置5%（ml/ml）正十四烷的正己烷溶液中，展开至薄层板的顶部，晾干]上，以0.1mol/L枸橼酸溶液-0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-丙酮（60∶40∶1.5）为展开剂，展开，取出，于105℃加热5min，立即喷以用展开剂制成的0.1%茚三酮溶液，在105℃加热15min后，检视。供试品溶液所显主斑点的位置应与对照品溶液的主斑点相同”。

又如，规定丙酸睾酮注射液的薄层色谱法鉴别试验为：取本品适量（约相当于丙酸睾酮10mg），加无水乙醇10ml，强力振摇，置冰浴中放置使分层，取上层乙醇溶液置离心管中离心，取上清液作为供试品溶液；另取丙酸睾酮对照品，加无水乙醇制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（19∶0.5 ）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

图4-5　维生素C片的薄层色谱法鉴别图

1—供试品溶液； 2—对照品溶液

【实例4-4】　维生素C片的薄层色谱法鉴别

鉴别方法　取维生素C片细粉适量（约相当于取维生素C 10mg），加水10ml，振摇使维生素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加水溶解并稀释制成1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5∶4∶1）为展开剂，展开，晾干，立即（1h内）置紫外光灯（254nm）下检视。

测定结果　供试品溶液浓度为1.1mg/ml，对照品溶液为1.0mg/ml，照薄层色谱法试验，实验结果见图4-5。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色与对照品溶液的主斑点相同。

结论：符合规定。

二、 高效液相色谱和气相色谱鉴别法

一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱法或气相色谱法操作条件进行试验。一般要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致，例如，《中国药典》（2015年版）规定头孢克洛的高效液相色谱法鉴别试验为：“在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。”含量测定方法为内标法时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中的主峰保留时间与内标物色谱峰的保留时间比值相同。又如，《中国药典》（2015年版）规定盐酸去甲万古霉素的高效液相色谱法鉴别试验为：“在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。”

此外，《中国药典》还采用其他方法对药物进行鉴别。生物学鉴别法是利用微生物或实验动物进行药物鉴别的方法。如青霉素钠及其针剂、青霉素钾及其针剂、玻璃酸酶及其针剂、胰岛素等，都是采用生物学法进行鉴别的。放射性药物用测定半衰期和能谱的方法进行鉴别，有些药物如氯霉素及其制剂等，用旋光法进行鉴别。此外还有纸色谱法、折射率法、显微镜及偏光显微镜法等。