任务四 霉菌的载玻片培养观察
一、任务分析
载玻片培养法是研究霉菌、放线菌等微生物生长全过程的一种有效方法。一般是把微生物接种在载玻片中央的小块培养基上，然后盖上盖玻片，放置于有一定温度和湿度的培养皿中，让微生物在这一狭窄的空间（载玻片与盖玻片缝隙间）中进行生长发育，这样就可以看到一个使微生物朝着接近水平面生长的标本，可随时用不同放大率的光学显微镜对其进行观察或摄影；可以在不破坏其自然生长状态下研究其形态、构造，特别适用于观察某些特殊构造，如曲霉菌的分生孢子梗、小梗着生和生长情况；并且还可在同一标本观察到培养菌不同阶段的生长发育形态，即生长全过程。
由于霉菌的菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，而且孢子很容易飞散，因此，在制片时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。乳酸石炭酸棉蓝染色液有如下优点：①可使菌丝细胞不变形；②具有杀菌防腐作用；③制成的片子不易干燥，且能保持较长时间；④具有一定的染色效果。
二、任务实施
1．明确目标
（1）学习并掌握载玻片培养观察霉菌形态的基本方法。
（2）培养学生规范操作和无菌意识。
2．任务准备
（1）器材 显微镜、恒温培养箱、水浴锅、培养皿、载玻片、盖玻片、∏形玻璃棒、接种环、接种针、酒精灯、火柴、滤纸。
（2）试剂 马铃薯20g、蔗糖2g、琼脂2g、水100mL、20%甘油等。
（3）菌种 产黄青霉、黑曲霉、黑根霉斜面菌种。
3．实施方案
（1）准备湿室 取干燥洁净的培养皿，于皿底放一层滤纸，放进一根“∏”形玻璃棒，在玻璃棒上放一块载玻片和两块盖玻片，然后盖上皿盖。如此准备4套，按常规将此装置培养皿叠起，外用纸包扎好，经121℃灭菌30min后，置60℃烘箱中烘干，此培养皿为载片培养的湿室（图2-25）。
图2-25 载片培养的湿室示意图
（2）倒平板 将高压灭菌冷却到50～60℃的马铃薯琼脂培养基10～15mL倒入一无菌培养皿内，制成平板，待用。
（3）制备小培养块 以无菌操作法用刀片将平板内的培养基切成0.5cm2的小块，用无菌镊子将小培养块放置到湿室内的载玻片上。
（4）点接孢子 依培养湿室标记，用接种针（环）分别挑取少量孢子，点种于培养小块的四边，最后用无菌盖玻片盖好，并在滤纸上滴加无菌水5mL，以保持湿润。
（5）保湿培养 置28℃恒温培养，36h后即可不断观察其孢子萌发、菌丝伸展、分化和子实体等的形成过程。
（6）镜检 从湿室中取出载玻片标本，置低倍镜或高倍镜下认真观察霉菌标本中营养菌丝、气生菌丝和产孢子结构的形态及特征性构造（图2-26～图2-28）。
图2-26 根霉（a）和根霉假根（b）
图2-27 曲霉
图2-28 青霉
4．结果分析
（1）把显微镜下观察到的曲霉、青霉、根霉的菌丝特征性构造（假根、足细胞、分生孢子头、分生孢子梗、分生孢子等）记录在表2-17中。
表2-17 显微镜观察记录表
（2）绘出曲霉、青霉、根霉的形态图。
三、任务评价
对照标准（表2-18）自我评价，小组评价，检查任务完成情况。
表2-18 实训操作评价标准
四、注意事项
（1）做载片培养时，点种的菌种量不宜多，小培养块不易太厚，盖上盖玻片时，不要把培养基压碎或压平而无缝隙。因为培养的霉菌是好氧菌。
（2）观察时，应先用低倍镜沿着琼脂块的边缘寻找合适的生长区，再换高倍镜。