任务二　常用玻璃器皿的清洗、烘干、包扎

一、任务分析

为保证微生物实验操作的安全性、可靠性，实验所用的物品在灭菌前均需进行清洗、烘干、包扎。如玻璃器皿、接种针、注射器、吸管、试管、烧杯、培养基、无菌衣、口罩等。根据器皿的实际状态：使用过的、新购置而未使用过的，器皿的污染程度、是否接触菌液等，选择适宜的清洗方法，并进行干燥、包扎。包扎可使灭菌后的器皿在一定时间内保持无菌状态。因此，器皿的清洗、烘干、包扎是微生物实验前的一项重要准备工作。

二、任务实施

1．明确目标

（1）能依据器皿的污染程度选择正确的方法完成器皿清洗。

（2）能完成培养皿、试管、锥形瓶、移液管等常用玻璃器皿的包扎。

（3）规范操作培养学生良好的职业道德，增强责任意识。

2．任务准备　

（1）试剂　新洁尔灭，75%酒精，95%酒精，5%石炭酸，2%来苏儿，2%盐酸，二甲苯，浓硫酸，重铬酸钾，洗衣粉，肥皂。

（2）器材　高压灭菌器，电炉子，烧杯，试管，吸管，培养皿，锥形瓶，载玻片，试管刷，棉花，牛皮纸或报纸，线绳，剪刀，纱布，壁纸刀。

（3）文件　药品生产企业《玻璃器皿的清洁标准操作规程》（表1-4）。

3．实施方案

（1）玻璃器皿及用具的清洗

① 使用过玻璃器皿的清洗　玻璃器皿使用后，应在未干燥之前洗涤，尤其是试管、培养皿、锥形瓶、烧杯、试剂瓶等玻璃器皿，如不能立即洗，也应立即放入洗涤液中浸泡，然后用瓶刷（试管刷）内外刷洗，最后用清水或蒸馏水冲洗2～3次，晾干备用。如有油污时可用热碱水（或热肥皂水等）洗涤，再用清水冲洗干净，当倒置仪器，器壁形成一层均匀的水膜，无成滴水珠，也不成股向下流时，即已洗净。然后倒置控水自然干燥，急用时可放干燥箱烘干。若需要更洁净的器皿，可用铬酸洗涤液浸泡（试管、烧杯、培养皿等浸泡10min，吸管、滴定管则要1～2h），然后用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水清洗，器皿洁净、光亮。

装固体培养基的玻璃器皿应先将其基质刮去，然后洗涤。接触过菌液或微生物培养物的玻璃器皿，使用后应立即投入2%的来苏儿或0.25%的新洁尔灭或5%的石炭酸消毒24h，然后高压蒸汽灭菌，然后用瓶刷内外刷洗，自来水冲洗干净后再用蒸馏水冲洗。

吸过血液、血清、菌液或含糖溶液的玻璃吸管，使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，免得干燥后难以冲洗干净。量筒或标本瓶底应垫以脱脂棉花，否则吸管投入时容易破损。待实验完毕再集中清洗。若吸管顶部塞有棉花，则冲洗前先将吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，用水将棉花冲出来。

洗涤载玻片、盖玻片时，先看是否使用了香柏油，载玻片上如滴有香柏油，要先用吸水纸擦拭去油，再用吸水纸沾少许二甲苯擦拭，然后放入肥皂水中煮沸5～10min，用自来水冲洗干净，干燥后可保存在95%的酒精中备用。用时可在火焰上烧去酒精。此方法洗涤和保存的载玻片清洁透亮，没有水珠。检查过致病菌的载玻片及盖玻片，应先用2%的来苏儿或0.25%的新洁尔灭浸泡消毒，高压蒸汽灭菌后按上述方法洗涤保存。

② 新购置的玻璃器皿的清洗　新购置的玻璃器皿常含有较多的游离碱，最好用1%～2%的盐酸溶液浸泡2～6h，再用清水洗涤，也可浸在肥皂水中12h，再用自来水冲洗。

③ 橡胶类物品的清洗　未接触有害微生物的，可用自来水洗干净，用蒸馏水浸泡并煮沸、晾干、包装。

接触了有害微生物的，应先用自来水煮15～20min或高压蒸汽灭菌后，再按上述方法处理。

④ 金属器械的清洗　未接触有害微生物的，可直接清洗，擦干。接触了有害微生物的，应用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20min，急用时可灼烧灭菌。

几种常用的洗涤液见表1-5。洗涤砂芯玻璃滤器的常用洗涤液见表1-6。

（2）玻璃器皿的干燥　洗净的玻璃器皿，一般是在室温下自然干燥，若需要高温干燥或急需，可使用电热干燥箱干燥，温度一般在80～120℃为宜，使用干燥箱时应注意，要在温度下降到60℃以下再打开箱门，取出器材使用。

（3）玻璃器皿的包扎　包扎是灭菌前的一项重要工作，其目的是使灭菌后的器材在一定时间内保持无菌状态。

① 培养皿的包扎　将洗净干燥的培养皿，每5～10套叠在一起，用牛皮纸或报纸边滚动边压住报纸卷起培养皿，将其包扎成圆筒状，两个端头随着滚动要让两边的纸进行折叠（图1-24），折叠的大小尽量一致，使其两端的纸折叠成底与盖，再用棉纱线捆扎好，以免散开。然后进行干热灭菌。使用时在无菌室中打开取出培养皿。

② 试管、锥形瓶的包扎　试管和锥形瓶灭菌，都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，一般用纤维长的棉花，不用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水变湿，造成污染。要求棉塞紧贴玻璃管壁，没有缝隙，松紧适宜。过紧容易挤破管口且不易塞入；过松易掉落和污染。制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口，也可借用玻璃棒塞入。通常会选用折叠卷塞法制作棉塞（图1-25）。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口（图1-26）。若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳打一个活结。锥形瓶加棉塞后单个用报纸或牛皮纸包扎，进行干热或湿热灭菌。若试管和锥形瓶中装有培养基，包扎后应用笔标记培养基的名称、制备时间等。为了节省棉花或节省时间，在配制实验临时所用的无菌水和培养基时，也可以用硅胶试管塞代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口，可包扎6～8层纱布以代替棉花。其他如无菌抽滤瓶和细菌滤器等的灭菌可采用同样的方法进行包扎。

③ 吸管的包扎（图1-27）　洗涤干净且烘干后的吸管，在口吸的一端用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉花（距管口0.5～1cm处），以防止使用时将外界的杂菌吹入管中或将管内的菌液吸出管外，塞入棉花的量要适宜（1～2cm长），松紧要合适，既可使吹吸气体流畅且棉花不易滑落。管口有棉絮纤维外露时可用火焰烤去。每支吸管用一条宽4～5cm的纸条（旧报纸或牛皮纸），吸管的尖端在头部，将纸条一端折叠成3～4cm的双层区，以30°～40°的夹角折叠纸条包住尖端（夹角太小则纸条易松开，夹角太大则纸条长度要求长），然后用手压紧吸管在桌面上向前搓转，吸管以螺旋形包扎起来，吸管的尾部用剩余纸条打结，防止纸卷松开，并在结上标注吸管的规格。常常是若干支吸管扎成一束放入移液管筒中，进行干热或湿热灭菌，或将多支包扎好的吸管用报纸或牛皮纸总包裹后再扎好，进行干热灭菌或湿热灭菌，备用。要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去吸管，切忌从头部打开，禁止手指接触吸管尖部至吸管的1/3处。

三、任务评价

对照标准（表1-7）自我评价，小组评价，检查任务完成情况。

四、注意事项

（1）接触过微生物的器皿洗涤前一定要先进行灭菌处理。

（2）玻璃器皿使用后应及时进行清洗，一方面有利于选择合适的洗涤剂，因为在当时容易判断残留物的性质；另一方面，仪器内壁不留有难去除的附着物，但搁置一段时间后，就有残留物附着到仪器内壁，使洗涤变得困难。

（3）切不可任意使用各种试剂来洗涤玻璃仪器，根据实验目的选择适宜的试剂及方法，以达到洗涤标准。