第二节　一级种制作

一级种，为食用菌生产中至关重要的基础，比如说，以平菇为例，一个一级种的生产用种，可以转接4～6个二级种，每个二级种又可转接15～30个三级种，按照栽培用种率为10%来计算，那么，这个一级种最低投料量应达到500千克干料，其比率大约是1∶1000；如果该一级种是F1级，该数字尚应扩大40倍左右。所以，从业三十多年的经验告诉我们：一级种，是菌种生产的重中之重，万不可掉以轻心。

一、配方及其注意要点

一级种的配方，其实很简单，只要根据资料介绍的配方进行称量和制作就好了。但是，任何事情都会有个要点，即：一定要根据当时的环境、温候以及原材料等实际情况而定，不要机械。

（一）基本配方

1.适用于平菇、姬菇、草菇、金针菇、鸡腿菇等大部分品种的通用型配方

配方一：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂粉10～15克，水1300毫升。该配方适于转接、扩大等生产用。

配方二：马铃薯200克，麦麸30克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，蛋白胨3克，食母生4片，维生素B1 　2片，琼脂粉10～15克，水1300毫升。该配方适于商品母种及转扩、分离菌种等生产用。

配方三：马铃薯200克，麦麸30克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，蛋白胨3克，琼脂粉15～20克，水1300毫升。培养基斜面冷却后，每支斜面试管内加入氯霉素眼药水2～4滴。该配方适于菌种脱毒、菌种分离，尤其适用基质分离、室外分离等操作用。

配方四：玉米淀粉30克，麦麸50克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，蛋白胨3克，食母生4片，维生素B1  2片，水1100毫升。

2.适用于粪草型品种如双孢菇、姬松茸等生产用配方

配方一：腐熟粪草（栽培基料晒干）200克，麦麸50克，玉米粉20克，葡萄糖20克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。

配方二：栽培废料（双孢菇废料、晒干）200克，麦麸、玉米粉各50克， 葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。

配方三：干麦草（或稻草）50克，牛粪粉50克，麦麸、玉米粉各50克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，食母生6片，维生素B1 2片，琼脂粉13～16克，水1500毫升。

配方四：葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母膏5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.5克，食母生4片，维生素B12片，琼脂粉13～16克，水1000毫升。

3.适于木腐菌如灵芝、金针菇、杨树菇、茶新菇、柳松菇、白灵菇、杏鲍菇等生产用配方

配方一：阔叶木屑60克，麦麸30克，葡萄糖15克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。该配方适于转扩及保存菌种用。

配方二：棉籽壳50克，麦麸、玉米粉各20克，葡萄糖20克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。该配方适于转扩菌种用，亦可用于保存。

配方三：小麦60克（煮汁），玉米粉30克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。该配方适于商品菌种生产用。

配方四：阔叶木屑30克（或小木块50克），麦麸、玉米粉各20克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1克，维生素B1 1片，蛋白胨5克，琼脂粉13～16克，水1500毫升。该配方适于转扩及分离菌种用。

4.猴头菇专用配方

新鲜马铃薯200克，麦麸、玉米粉各15克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，食母生4片，维生素B1 2片，琼脂粉13～16克，水1300毫升。该配方要求：马铃薯一定要新鲜，刚收获的马铃薯最佳，并需调pH值6～6.5。

5.草菇专用配方

苹果150克，麦麸30克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，维生素B1 2片，琼脂粉13～16克，水1100毫升。

6.北虫草专用配方（冬虫夏草分离兼用）

配方一：马铃薯200克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，磷酸二氢钾1克，琼脂20克，水1200毫升。

配方二：葡萄糖10克，蛋白胨10克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克，生长素5毫升，琼脂20克，水1100毫升。

配方三：蔗糖30克，天门冬酰胺1克，磷酸二氢钾1.25克，硫酸镁0.3克，氯化钾0.5克，硝酸钠0.5克，琼脂20克，水1100毫升。

7.最新配方

最新配方一：蘑菇杀青水1100毫升，葡萄糖15克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，食母生4片，琼脂粉13～16克。该配方为通用型，适用于大部分品种。

最新配方二：食用菌菌柄（干品）100克，玉米粉30克，葡萄糖15克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，食母生4片，琼脂粉13～16克，水1500毫升。该配方为通用型，可适于大部分食用菌品种。

最新配方三：新鲜豆汁200毫升，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，酵母膏5克，维生素B1 1片，琼脂粉13～16克，水900毫升。该酸方为高蛋白营养，适于大部分品种，尤其在珍稀品种生产时，更具优势性。

最新配方四：洋葱、胡萝卜各150克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1克，食母生4片，维生素B1 1片，蛋白胨5克，琼脂粉13～16克，水1200毫升。该配方在草菇等品种生产时表现较好。

（二）培养基制备

马铃薯去涩皮、芽眼，洗净，切薄片，加水与麦麸同煮，沸后煮30分钟，四层纱布过滤，并补足滤液至1000毫升，将琼脂加入滤液中煮至全部溶化，然后依次加入葡萄糖等辅料，食母生等充分研碎最后加入，全部溶化后趁热分装试管。试管不分规格大小，均应装至约1/5～1/4高度，塞棉塞后每7支一把，牛皮纸封管口一端并捆扎。

（三）注意要点

材料要新鲜，不能有霉变；马铃薯尽量不要发芽，已经发芽的要剔除干净；尤其是制猴头菇菌种，马铃薯一点也不能发芽，用刚出土的新鲜的最好。

二、分装及其注意要点

分装试管注意以下要点。

（1）液量适宜　装到试管高度的1/5～1/4即可，不要超过1/4。

（2）培养基液体不要沾附到试管口，尤其不要沾附到棉塞位置。

（3）试管外部不要有培养基液体。

三、灭菌及其注意要点

（一）灭菌操作

采用高压蒸汽灭菌形式，一般要求达0.05MPa时排冷空气一次，再升至0.11MPa开始计时，维持30分钟后灭菌结束，停止加热，任其自然降压至0时，打开放气阀，取出培养基试管并趁热将其摆成斜面，注意斜面长度约为试管长度的3/5～4/5，温度降至40℃时斜面成型并固定。

（二）注意要点

（1）到达0.05MPa时必须排空，否则，可能出现“压力到，温度不到”的问题，导致灭菌失败。灭菌锅内冷空气排除程度对温度的影响见表2-1。

（2）计时开始后，必须确保压力准确并持续；如有中途下降等问题，如果时间偏少，可以重新计时，如果时间偏长，则需另行制作培养基。

（3）灭菌期间，不得离开；确需离开时，必须交代另人负责——这是责任问题。

四、接种及其注意要点

（1）准备工作　斜面冷却后，码于操作台；备好酒精棉球、接种工具等；空间喷洒百病傻药物后，将种源亦放于操作台；打开接种净化机，10分钟后即可开始接种。

（2）接种操作　使用75%酒精棉球将双手擦洗一遍；点燃酒精灯，灼烧接种钩；在待其冷却的时间里，将待接试管解开扎绳，放入酒精灯左侧。接种钩自然冷却至30℃以下或常温时，即可开始接种操作，基本动作如下：左手平伸，虎口处夹住种源试管中下部，试管口以下10厘米左右放入无名指和小手指的指尖处，使种源试管与拇指内侧呈约100°夹角，右手拔掉种源棉塞的同时使试管口在酒精灯火焰上方约2～5厘米位置处，右手持接种钩，伸入种源试管内，先将气生菌丝压倒，以防遮挡视线，再将菌种尖端约1～2厘米处连同培养基一同挖出，弃之不用；接种钩仍伸入种源试管内，腾出右手拿起待接试管，从其底部伸入左手虎口处种源内侧，并与种源试管平行，且使两试管口呈一条直线；旋转棉塞并向外拔松但不拔出，翻转右手用无名指与中指或小指的背面夹住棉塞向外拔出，同时使管口与种源试管口相接触，平行于火焰上方；右手持接种钩，将菌种连同培养基挖取约半个大米粒大小一块，用接种钩托起抽出试管，通过火焰上方迅速伸入待接试管，将菌种块放入斜面培养基的中间位置。抽出接种钩插入种源试管，翻转右手，将棉塞经过火焰迅速塞入已接种的试管，同时使试管偏离火焰，右手将其塞紧至原始位置，抽出接好的试管放入酒精灯右侧或方便的地方，一支母种接种完成。周而复始，直至完成全部接种。

（3）即时标记　全部接完后，应将菌种扎把，每7支一把，扎紧后，在封包纸上注明品种名称或菌株代号、接种时间、操作人员姓名等标记。如果一次接种操作中有若干个品种或菌株，则应每完成一个品种或菌株即进行相应标记。严格、准确的标记，是菌种生产中操作者的工作作风、职业道德的具体体现，万万马虎不得。

五、培养及其注意要点

（1）温度　一级种的培养温度等条件，应根据生产的品种具体设定和调控，一般平菇、鸡腿菇、金针菇、白灵菇等大多数品种应调至25℃左右，草菇应调至28℃以上。

（2）避光　避光培养，是一级种培养应遵守的规程之一。

（3）特殊情况　假如在中温环境中，在培养箱恒定的温度条件下，一级种的长速尚不如在自然条件下的长速快。据分析，应该是培养箱内的环境中新鲜空气不足，并且，亦与自然条件下的昼夜温差刺激有关。

六、检查剔杂及其要点

培养第2天开始，每天检查一次，发现任何与种源菌丝不同的红、黄、绿、黑、灰等污染，应及时剔出并作相应的杀菌工作，以防杂菌扩散。大部分母种生产的成功率为100%，偶有污染，也是个别的，或是特殊原因所致。如果某次接种的污染率超过30%，则该批菌种保留的价值不大。针对污染，应分析原因，找出症结所在，既防止再次发生，也便于清理污染源。

七、一级种的基本特征

（一）合格一级种的共同特征

（1）生长整齐　同一品种、同一来源的母种，扩繁后，不论扩繁量有多大，只要使用的培养基相同，试管与试管之间，菌丝的生长外观没有明显的差异。生长外观包括长速、色泽、菌落的厚薄及气生菌丝的多寡等。

（2）长速正常　不同种、不同品种的食用菌，在一定的营养和培养条件下，都有其固定的生长速度。如平菇一般在PDA改良培养基上，使用18毫米×180毫米规格的试管，在25℃黑暗条件下7天即可长满斜面。如果长速不在这一范围内，说明菌丝活力不够，或老化，或退化，一般不宜再使用。

（3）形态特征　不同品种的食用菌，其母种都有各自的形态，如菌落形态、气生菌丝的多寡、菌丝的色泽、培养中是否产生色素及其色泽、生长边缘是否齐整、菌丝体的生长态势等。

（4）菌落边缘　菌落生长的边缘外观饱满、整齐、长势旺盛。

（二）退化或老化的基本特征

不同种的食用菌菌种，退化、老化的表现特征不同，但有一些规律可循，其主要表现有以下几方面。

（1）长速减慢　退化、老化的菌种，培养期间往往长速变缓，特别是在琼脂培养基上未发满试管以前，与正常母种有明显的区别。

（2）长速不一　退化、老化的菌种，其继代培养时，个体间长速差异明显，不能同时完成培养。

（3）长相不一　退化、老化的菌种，其继代培养物长相不完全相同，往往菌丝不舒展，有的菌丝边缘不整齐，有的菌丝干瘪，有的菌丝稀疏，有的气生菌丝变少，有的出现异常色素，甚至分泌到培养基中。

（4）似非拮抗现象的出现　当在琼脂培养基上进行培养时，在斜面上出现星星点点的小菌落，这些小菌落之间，不能随菌落的扩展而融为一体，而是两者边缘之间总有谁都不能逾越的距离，但又不呈现典型的拮抗现象。

（三）品种特征

1.平菇

菌丝洁白、浓密、粗壮、整齐、气生菌丝发达，多的可布满试管空间，多不产生色素，爬壁能力强。接种块周围无菌丝稀疏区。菌丝生长速度快，适温20～22℃经6～8天即可长满试管斜面，低温保存能产生珊瑚状子实体原基；耐高温，短时间在34℃下正常生长；有些菌株气生菌丝过多，形成很厚的菌被将管壁包满，很容易在种块或管壁上形成原基，就是老化或多次转管的菌种，不宜使用；有些菌株在高于28℃的温度下培养或培养时间过长，气生菌丝顶端往往会产生橘红色分泌物，这虽不影响使用，但已不宜作为种源扩大培养；气生菌丝过多的母种也不宜扩大培养。

2.双孢菇

菌丝纤细、稀疏、灰白，优良菌丝上下均匀，没有生长很快的扇形变异，一般22～24℃条件下15天以上才能长满斜面，超过28℃菌丝生长受抑制而发黄，若菌丝倒伏、发黄或形成黄白色菌被者，不能用于生产。以气生菌丝生长整齐、清晰、挺拔有力，基质菌丝多者为好。

（1）气生型　 孢子分离7～9天后，出现星芒状菌落。气生菌丝生长旺盛、白色或灰白色，尖端清晰整齐、挺拔有力，密度均匀，基内菌丝较发达，一般15～25天长满试管斜面。

（2）半气生型、匍匐型　菌丝紧贴培养基斜面，表面呈索状生长，挺拔有力，但生长缓慢，排列稀疏、清晰，常呈扇形生长，数日后多出现细细的菌索，菌丝纤细、微黄，气生菌丝很少，不易形成“菌被”，在适宜的培养基和环境条件下一般22～26天长满斜面。

3.香菇

菌丝洁白、浓密、粗壮而略显绒状、整齐有力，呈健康态势发展；一次转接生产的菌种，各个试管的菌丝表现均匀一致，没有大的差别；气生菌丝明显；接种块周围稍有菌丝稀疏现象，但无明显“秃菌丝区”； 常温培养的母种，因昼夜温差而导致菌丝表面呈小波浪状发展态势，但不会出现“无菌丝带”；拔开棉塞，即可闻到明显的香菇特有的菌香味，而无其它如酸、臭、腐等异味；4℃条件长时间保存时，会有小菇蕾发生。符合以上表现的菌种，基本可以认定为合格（生物特性等除外），可以放心使用。如试管内有除香菇以外任何颜色的菌丝或斑块、菌丝稀疏、长速过慢等特征，或者同一批菌种生长快慢不一、极不均匀，或者试管内有明显的异味等，均为不合格菌种，引种时不要购买，生产者应予以及时淘汰，不可用于生产。

4.金针菇

菌丝白色或浅灰白色，细绒毛状，初期较蓬松，后期气生菌丝紧贴培养基表面，有爬壁现象。菌丝生长速度较快，黄色品种在适温20～22℃10～12天长满斜面，白色品种稍慢。黄色品种常在培养后期出现黄褐色色素，使菌丝不再洁白，老化时表面出现淡污褐色斑块；白色品种则不如此。时间较长的菌种分泌色素；低温贮存时有细水珠出现，斜面上形成少量子实体。如菌丝由白色变为灰白或略带黄色，在管壁出现许多粉状物（即粉孢子）说明菌种开始老化；粉孢子多的菌株，品质一般不理想。

5.草菇

菌丝生长初期纤细、无色透明，多分枝的丝状体，似蚕丝，有金属光泽，后期呈淡白色、银灰色，老时灰黄色。菌丝生长速度快，在30～32℃条件下，5～6天即可长满斜面，再培养2～3天开始出现厚垣孢子，呈链状，初为灰白色、淡黄色，后渐变成褐色至锈红色（20多天），最后培养基表面出现紫红色。气生菌丝茂盛，而且爬壁能力强，在试管内生长蓬乱，每根菌丝清晰可见，布满整个试管空间，不易变黄，斜面上不产生子实体；菌丝变为淡黄褐色，是老化的表现。厚垣孢子出现过早过多，是种性开始老化的表现。若菌丝密集，颜色洁白，可怀疑混有杂菌。

6.鸡腿菇

菌丝浅灰白色，浓密，棉絮状，生长旺盛，边缘整齐、有力，基内菌丝分泌色素，使斜面培养基颜色加深，部分呈黑褐色。菌丝生长速度较快，适温25℃、10天左右菌丝即可长满试管斜面。菌丝随培养时间延长而变灰色，是鉴别鸡腿菇菌龄的重要特征。

7.猴头菇

菌丝生长不均匀，白色至灰白色、微黄色，线绒状，短而稀疏，紧贴在培养基表面，不爬壁，气生菌丝粗、短、少，基内菌丝多；常不规则地形成索状物，并在其上形成小子实体原基，外观上似小疙瘩，较老的菌丝形成节孢子，后期会分泌棕褐色色素，使斜面培养基呈茶色，颜色过深的基内菌丝活力下降，不宜使用；多次转管后生活力明显下降，当菌丝呈线粒状时，很难继续生长；转接后菌丝恢复慢，萌发后菌丝呈线绒状，向四周作放射状延伸；在PDA综合培养基上，黑暗恒温25℃下培养，14～20天长满斜面，在酸性培养基上生长快、旺盛；若使用有麦芽糖的猴头菇专用培养基，菌丝生长会大大改善，菌丝长速大大加快且浓密洁白，不再形成菌索和原基。

8.阿魏菇、白灵菇、杏鲍菇

该类品种的不同品种、不同菌株之间差异显著，有的品种菌落致密、微黄，生长缓慢，在PDA综合培养基上要3周左右长满斜面；有的品种菌落舒展、洁白，菌丝也较稀疏，生长较快， 2周即可长满斜面。

9.真姬菇

菌丝浓密洁白，气生菌丝旺盛，表面是绒毛状，生长不甚均匀，在加入有两种以上碳源的培养基上生长较好。在马铃薯酵母粉综合培养基上，黑暗恒温24℃下培养，14～17天长满斜面（不同品种间长速有差异）。

10.柳松菇

菌丝暗黄色，浓密，绒毛或绒毡状，生长整齐度好，在PDA综合培养基上长速较慢，气生菌丝较少，1000毫升培养基中加入适量木屑滤液并添加蛋白胨成分时，长速明显加快，但绒毡状菌丝则显得略薄，气生菌丝增加，一般要20天左右完成发菌。

11.木耳、毛木耳

菌丝白色，产生黑色色素，明显匍匐生长，边缘不齐，普通PDA综合培养基培养时，菌丝显得不旺盛，基本无气生菌丝产生。

12.杨树菇、茶新菇

菌丝较纤细，但长势有力，初白色，气生菌丝较少，平铺于培养基表面生长，边缘整齐，菌落薄厚一般。培养后期分泌深褐色色素到培养基中，并扩散到菌落表面，常在表面形成黑色稍有纤维化的斑块。在PDA综合培养基上，黑暗恒温25℃下，培养2周左右长满斜面。

13.灵芝

菌丝纤细、平坦、致密、洁白、均匀、整齐，匍匐生长，几乎不见气生菌丝，随着菌丝的生长，菌落的扩展，近接种块处的菌丝逐渐老化形成坚韧的菌皮，并随菌皮的老化，色泽逐渐为淡黄色，不分泌色素，易形成有菌管的子实体原基。在PDA综合培养基上，28～30℃黑暗培养，8～11天长满斜面。

八、一级种的基本标准

一级种的基本标准，应具备以下特质。

（1）用统一的或标准的菌种名称和编号（代号），不得把他人的菌种拿来随意编号或重新改名。

（2）经出菇试验、品比试验以及验证试验，具有优良的品种特性，或保持原菌株的生物特性。基本表现为：高产、优质、抗逆性强、生命力旺盛、适应当地气候特点和市场要求。

（3）有标签，并注明名称、编号、种性介绍、生产单位和生产日期。

（4）名称与内容相符。标明哪种菇即是哪种菇，标明哪个品种就是哪个品种，标明哪个菌株就是哪个菌株，标明哪种特性就是哪种特性。

（5）无任何杂菌污染，无虫、螨为害，并无潜在的病（杂菌、病原菌）虫（虫卵）等。

（6）普通生产用菌种的转代次数要低于8代，脱毒菌种的转代次数控制在3代，4代以后其脱毒性状则不明显。

（7）菌丝健壮。标志是：齐（先端生长整齐）、白（菌丝具有本品种应有的浓白、白或灰白色）、浓（菌丝浓密）、匀（菌丝生长均匀一致）、香（打开容器，无任何异味，有浓郁的菌香）。

（8）棉塞要干燥、不松动、无杂菌污染，容器无破损。